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NF-κB通路论文：CARD结构域对猪BCL 10表达及细胞周期的影响 【中文摘要】在细胞的信号转导过程中,NF-κB通路可以激活或者抑制核内基因的表达,从而将外界的刺激转化成细胞的信号。在免疫系统中,NF-κB在控制抗原受体信号转导通路、调控诱导核转录因子中同样起关键作用。BCL 10是参与NF-κB通路的一个重要功能基因。BCL 10正常的表达水平可以促进免疫因子的产生,增强机体的天然免疫和抵御感染的能力。反之,BCL 10的异常表达,比如过表达、过度磷酸化和核内表达会导致一系列细胞因子的非正常表达,从而影响正常细胞的生理功能,甚至会导致淋巴瘤等多种疾病的发生。已知BCL10的CARD结构域、磷酸化位点以及C末端序列参与几乎全部蛋白功能的发挥。参考以上的研究结果,我们开展猪BCL 10的研究工作。实验室前期工作:通过电子克隆得到猪BCL 10的全长基因,通过特异性引物在猪脾脏克隆到该基因片段,并得到该基因原核表达蛋白,掌握了其原核表达特点。同时,检测结果显示,猪BCL 10基因mRNA在脾脏中表达最高,胸腺、大脑和下颌淋巴结表达次之,肝脏只有微量表达,肾脏没有表达,初步获得该基因在猪体内的表达情况。本研究进一步探讨猪BCL 10的CARD结构域相关功能,通过该基因序列分析和真核表达观测,取得以下结果:1.根据猪BCL 10基因的特点,通过激酶的作用位点和空间结构的预测,找到了可能与其核内表达相关的位点,并成功构建出完整猪BCL 10基因的真核表达载体pEGFP-B。同时,通过大引物扩增法构建出真核表达载体pEGFP-D(缺失CARD结构域的猪BCL 10基因)和pEGFP-P(缺失Thr-Ser-Ser位点的猪BCL 10基因)。2.转染猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC)后,Western Blot检测表明融合蛋白得到表达。分析发现,TSS位点(Thr-Ser-Ser)参与猪BCL 10的CARD结构域与其它蛋白的相互作用,是该基因的重要位点。同时,TSS位点的缺失会导致BCL 10出现核内表达。这些结果证实,TSS在猪BCL 10基因中具有重要作用。3.细胞周期变化测定表明,猪BCL 10的CARD结构域会引起细胞的G 1期缩短,S期和G 2/M期延长,表明该结构域在细胞生长过程中影响DNA的复制以及细胞有丝分裂,过度表达会导致细胞在有丝分裂前期停滞积累,但不会导致细胞凋亡。从而???进一步研究猪BCL 10蛋白在信号转导中的作用特点,以及淋巴瘤等疾病的诊断与治疗奠定基础。 【英文摘要】NF-κB pathway can activate or inhibit the expression of nucleus genes to transfer the external stimuli into the cell signal during the process of cell signal transduction. In the immune system, NF-κB plays a similar role in the controlling the pathway of antigen receptor signaling transduction as well as the regulation and induction of nucleus transcription factors. BCL 10 is an important functional gene involving in NF-κB pathway and its normal expression can promote the production of immune factors, enhance innate immunity and defence capacity. Conversely, the abnormal expression of BCL 10, such as over-expression, over-phosphorylation and nucleus expression will lead to abnormal expression of a series of cytokines, thereby affecting the physiological function of normal cells and even resulting in various diseases including lymphoma. It is well known that CARD domain, phosphorylation sites, and the C terminal sequence