FastStart Essential DNA Green Master-中文说明书-BioRad版本 copy.pdfVIP

FastStart Essential DNA Green Master Version 04 （2013 年 10 月） 适用货号：06 402 712 001 5×1 ml (5×100 次反应，20μl体系) 06 924 204 001 10×5 ml (10×500 次反应，20μl体系) 产品保存条件：-15~ -25℃，避光保存 注意：该使用指南为简易版，在实际使用时请查阅正式英文说明书。 1. 产品概述 产品描述 管号/管盖色 标签 用途 保存条件 1 绿色 FastStart Essential DNA Green Master; 2×conc. ● 2×预混液, 即用型 ● 含 FastStart Taq DNA 聚合 酶，反应缓冲液，dNTPs, SYBR Green I, MgCl2 -15~ -25℃，避光保 存； 试剂首次融解后可 置 2~8℃保存一月* 2 无色 H2O, PCR grade 调整最终反应体系 -15~ -25℃ *请避免将该产品反复冻融。 反应液制备后(加入引物和模板后)，可在室温稳定放置 24h，需避光放置。 产品应用 FastStart Essential DNA Green Master 采用了热启动聚合酶以提高 qPCR 反应的灵 敏度和特异性，预混液包含了基于 SYBR Green I 检测模式的 qPCR 和两步法 qRT-PCR 进行 DNA 定量检测所需的所有试剂(除了引物与模板)。试剂的 Mg2+ 浓度已经优化，通用于不同的引物和模板特性，实验中无须优化。结合 UDG 酶 的使用，可在实验中防止 PCR 扩增产物的交叉污染。 该试剂适用于不需要 ROX 校正的实时荧光定量仪器。 2. 产品使用方法 2.1 实验前准备 实验最佳反应条件(包括 DNA 模板量、PCR 引物浓度、扩增温度程序、循 环次数) 应根据不同的模板/引物而异。 样本准备 ? 请使用纯度、浓度经优化摸索且不含 PCR 抑制物的 DNA 模板(如，基因组 DNA、质粒 DNA、cDNA)。为获得高质量的核酸分离产物，请使用以下试剂： — MagNA Pure LC 或 MagNA Pure Compact 系统结合系统配套的核酸分离试剂 盒，用于核酸自动分离。 — 手工核酸纯化请使用 High Pure Nucleic Acid Isolation Kit。 更多详细信息，请访问罗氏应用科学部主页 。 ? 在 20μl qPCR 体系中，请使用 50-100 ng 基因组 DNA，或108拷贝的质粒 DNA。如需放大反应体系，请相应地增加模板量。 ? 使用过量的模板，将在扩增过程中过量消耗反应体系中 SYBR Green I，导致 最终的荧光信号值降低。 ? 如果您反转录实验后获得的 cDNA 未经纯化，残留较多的 RNA、寡核苷酸、 及反转录引物，请适量减少未稀释 cDNA 的模板加入量，建议最大用量为 2μl。 并且在 qPCR 反应程序中使用 95℃ 10min 的热启动程序，将增加检测灵敏度， 使 Cq 值的检出提前。 引物 PCR 体系中引物最终浓度范围：0.2 ~ 1 μM。初次试验时可尝试的每个引物浓度 为 0.5 μM。实验中使用的引物对浓度相等。 阴性对照 为了检测实验污染，在阴性对照管中将DNA模板替换为PCR级别的水进行检测。 反应体积 FastStart Essential DNA Green Master 适用于多种不同体积的反应体系，反应中使 用的反应管/板及合适的反应液体积，请参考不同仪器供应商的建议。 2.2 实验步骤 2.2.1 Bio-Rad? CFX96TM/CFX ConnectTM/iQTM 5 Instrument 上的程序设置 建议设置： Step 1: 95℃ for 10: 00 Step 2: GOTO: 39~44 more times* 95℃ for 0:10 60℃ for 0:15 72℃ for 0:20 + Plate Read Step 3: Melt Curve 上述设置包括如下温度程序： Step 1 (预孵育): FastStart Taq DNA 聚合酶激活和 DNA 变性 Step 2：靶 DNA 扩增 Step 3：通过熔解曲线鉴定扩增产物 *在扩增条件（如引物和模板浓度）已经优化的情况下，可将扩增时间缩短：95℃ 10s, 60℃ 10s, 72℃ 10s. 但请注意：延长退火和延伸的时间，将有助于提高