细胞信号转导(2014.11.27)讲述.ppt

NF-κB信号通路与肿瘤 （八）文献讲解 Signal transduction mechanisms involved in S100A4-induced activation of the transcription factor NF-κB BMC Cancer 2010, 10:241 Background S100A4属于钙离子结合蛋白S100家族成员 具有促进转移功能，参与细胞周期、细胞生长、细胞分化和细胞运动等。然而，其促肿瘤转移的分子机制尚未明确。 以往的研究表明， S100A4能够激活NF-κB转录因子，以及JNK、ERK和p38的激酶活性。然而，这些激酶与NF-κB是否有联系， S100A4激活NF-κB的上游分子是什么均未明确。 ？ S100A4通过什么途径激活NF-κB，从而参与肿瘤的转移 NF-κB信号通路 1. Signal transduction mechanisms involved in S100A4-induced NF-κB activation and expression of target genes 结果1：丝/苏氨酸激酶抑制剂剂量依赖性抑制IκBα的磷酸化 H-7 and staurosporine(星形孢菌素）：丝/苏氨酸激酶抑制剂 U-73122 and compound 48/80：磷脂酶C抑制剂 AG 18 and genistein（染料木素）：蛋白酪氨酸激酶抑制剂 GF 109203X： PKC激酶抑制剂 GDPβ and suramin（苏拉明）：G蛋白偶联受体抑制剂 LY294002：PI3-K激酶抑制剂 1. Signal transduction mechanisms involved in S100A4-induced NF-κB activation and expression of target genes 结果2：丝/苏氨酸激酶抑制剂剂量依赖性抑制IκBα的磷酸化和减少IκBα总蛋白 实验方法：NF-κB荧光素酶报告基因 结果3： H-7和staurosporine抑制S100A4诱导的NF-κB活性 1. Signal transduction mechanisms involved in S100A4-induced NF-κB activation and expression of target genes II-11b cells II-11b cells KPDX cells 实验方法：荧光定量PCR（real time PCR） 结果4： H-7和staurosporine下调S100A4 诱导NF-κB目标基因的表达 1. Signal transduction mechanisms involved in S100A4-induced NF-κB activation and expression of target genes NF-κB调控基因：ephrin-A1和optineurin A B C D 2.S100A4 induces phosphorylation of IKKα/β and inhibitors of Ser/Thr kinases suppress IKK-mediated phosphorylation of IκBα 实验方法：免疫共沉淀和激酶活性检测 结果5：S100A4激活 IKKα/β激酶 3.The Ser/Thr kinases MEKK1, NIK and AKT are not involved in S100A4-mediated activation of the IKK complex 实验方法（A图）：基因过表达 结果6：丝/苏氨酸激酶MEKK1、NIK和AKT并不 参与 S100A4介导IKKα/β激酶的活化 KD：kinase Dead 4.RAGE-independent NF-κB activation upon S100A4-stimulation of II-11b cells 实验方法（A图）：RNAi（RNA干扰） 结果7：S100A4诱导NF-κB 的活化不依赖RAGE RNA干扰 RNA干扰（RNA interference，RNAi）：在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的基因沉默现象。 秀丽新小杆线虫（C. elegans） RNA干扰的基本机制 dsRNA导入细胞后被核酸内切酶切割成多个具有特定长度（21～23bp）和结构的小片段RNA（ small interfering RNA，siRNA ）。 R