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化学专业论文 精氨酸激酶(ak)的提取与纯化毕设论文
学号 编号 研究类型 基础研究 分类号 Q51
毕业论文(设计)
Bachelor’s Thesis
论文题目 精氨酸激酶(AK)的提取与纯化 作者姓名 指导教师 所在院系 专业名称 完成时间 主要符号对照表
AK 精氨酸激酶E.coli 大肠杆菌
IPTG异丙基硫代-β-D-半乳糖苷Kanamycin 卡拉霉素
CMC CM-Cellulose
S-100 SephacrylTM-100
2-mercaptoethanol 巯基乙醇
Glycine 甘氨酸
PMSF 苯甲基磺酰氟
EDTA 乙二胺四乙酸Arg 精氨酸
ADP 二磷酸腺苷
ATP 三磷酸腺苷
h 目 录
1 1
1.1精氨酸激酶(AK) 1
1.2蛋白质的分离与纯化 2
2实验试剂以及实验仪器: 5
2.1实验材料 5
2.2主要实验试剂与仪器 8
3实验方法 9
3.1活化菌种 9
3.2扩大培养 9
3.3 IPTG诱导AK基因的表达 9
3.4 蛋白质提取 9
3.5蛋白质的检测 10
3.6蛋白质的纯化 10
4结果与分析 12
4.1 AK诱导表达电泳图 12
4.2 蛋白质经CMC离子交换的层析谱图和电泳图 13
4.3蛋白质经分子筛S-100交换的层析谱图和电泳图 14
4.4蛋白质经Q-sepharose阳离子交换的层析谱图和电泳图 16
4.5 AK经各步纯化后的SDS电泳图谱 17
5讨论 18
参考文献: 20
精氨酸激酶(AK)的提取与纯化
摘要:精氨酸激酶(ATP:N-精氨酸磷酸转移酶EC2.7.3.3)存在无脊椎动物中,是参与细胞代谢的磷酸激酶。重组有AK基因的Rosetta,在含有50 μg/ml的卡纳霉素的LB培养基中培养。当A600达到0.6-0.8时,用终浓度为0.2 mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导培养3。加裂解液后用超声破壁离心取上清,得到精氨酸激酶粗提液。通过CM-Cellulose阳离子交换层析,SephacrylTM-100凝胶过滤层析,Q-Sepharose阴离子交换层析分离纯化得到电泳纯的精氨酸激酶。
关键词:精氨酸激酶提取与纯化
Extraction and Purification of Arginine KinaseAbstract: Arginine kinase(ATP:L-arginine phosphotransferase EC 2.7.3.3),plays an important role in cellular energy metabolism in invertebrate. E. coli Rosetta which contains recombinant AK gene was grown in LB medium containing kanamycin (25 μg/mL). When absorbance at 600 nm value was between 0.6 with 0.8, isopropyl β-D-thiogalactopyranoside was added to 0.2 mM and the incubation was continued an addition 3 h. The cell was broken and centrifugated, then the crude cell extract was harvested. Furthermore it was purified by following three methods in turn: CM-Cellulose positive ion exchange chromatography, SephacrylTM-100gel filtrate chromatography, and Q-Sepharose anion exchange chromatography. A purified AK was found to be homogenous by SDS poly -
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