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绝对定量方法(LC)
刘富发常用方法
外标法
内标法
简便、快速
系统误差大(检测器的响应性能、柱温、流动相流速及组成、进样量、柱效等，样品前处理)
克服色谱条件差异，进样量不准
合适的内标物
外标法
配一系列浓度标样(6~8)
母液
6
稀释
5
稀释
4
稀释
3
稀释
2
稀释
1
稀释
内标法
标样母液
+
内标标样
6
5
4
3
2
1
标样溶质浓度依次升高
内标标样浓度一致
内标物的要求
?化学结构与待测组分相似(同系物、异构体)
?在样品中不存在
?不与样品中组份发生任何化学反应
?保留值与待测组分接近
?浓度（响应值）与待测组分相当
?其色谱峰与其它色谱峰分离好
选择性
色谱分离条件(固定相，流动相，疏水性，检测器)
分离度
峰高、峰面积
痕量分析
t—保留时间；w—半高峰宽
精密度
重现性（日内，日间），保留时间、峰面积
5次重复，三种不同含量水平（不同含量的精密度要求不同）
LLOQ CV20%;其他 CV15%
?峰积分不一致
?进样或进样器有问题
?样品分解或制样时引入了杂质
?色谱问题
?检测器响应变化
精密度的影响因素
准确度
对比成熟方法
对比已知含量的标准物
一定量参比物加入到空白基质(回收率)
测量值与真实值的误差
?峰面积积分不正确
?样品分解或制样时导入杂质
?样品瓶不密封,样品或溶剂挥发
?制样不正确
?进样问题
?内标制备不正确
相关系数
标准曲线的线性范围
A:杂质未分开
B:检测器响应非直线
C:理想状态
D:样品损失
6种不同浓度，测量值50%-150%
检测限、定量限
检测限 SNR3
定量限 SNR10 SNR20
稳定性 (低、高浓度)
样品反复冻融
室温下日内变化(4-24h)
样品前处理
样品长时间的稳定性
样品重复测定（RSD20%）
耐用性
温度
湿度
操作者
仪器
试剂
色谱柱
抵制误 操作能力
小结
操作准确(枪、电子天平、容量瓶)
仪器稳定性
实验条件的一致性
样品稳定性
谢谢！
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