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L052 连续逆流层析在蛋白质分离中的应用 武斌 朱家文 陈葵 纪利俊 周武 （华东理工大学化学工程研究所，上海 200237 ） 关键词 连续逆流层析 切换 间歇层析 人血清白蛋白 卵清蛋白 中图分类号 TQ028 Q55 文献标识码 A SEPARATION OF PROTEIN MIXTURE BY CONTINUOUS COUNTER-CURRENT CHROMATOGRAPHY WU Bin ，ZHU Jia-wen，CHEN Kui，Ji Li-jun and ZHOU Wu （Chemical Engineering Research Center ECUST, Shanghai 200237, China ） Abstract Counter-current chromatography is an efficient process for separation of many mixture systems with similar components. A novel apparatus for continuous counter-current chromatography was developed in this work, in which great improvement was made as compared with the traditional Carousel type equipment for large-scale counter-current chromatography. Experiments of continuous chromatography with simulated sytems(mixture of human serum albumin and ovalbumin) were done, the result of which showed that efficient separation of mixtures of different components with similar structures or properties can be obtained. Keywords continuous counter-current chromatography, switch, batch column chromatography, human serum albumin, ovalbumin 引 言 作为蛋白质产品分离纯化的主流技术，柱层析具有很高的分离效率，通常采用固定床 间歇操作方式，操作简单，但存在着载体利用率低和过程效率低的问题。采用连续逆流操作 层析，分离效率和产率均有提高；对于难分离体系，逆流层析过程是一种有效分离手段。随 着吸附和层析分离技术研究的深入，相继开发了多种用于实现连续操作的设备形式，包括： [1-3] 移动床、模拟移动床、旋转木马系统等 。 现有蛋白质层析技术，均采用固定床层析工艺，先后要进行上柱、展开和洗脱操作， 操作周期长，间歇操作方式导致了固定相的利用率较低，流动相用量大。如果将固定床间歇 操作改为连续逆流操作，推动力增加，分离效率提高，且能连续稳定地得到产品。蛋白质层 析分离所用载体多为凝胶，凝胶载体为软载体，易被压缩变形而造成较大床层压力降；须采 用适当操作方式来实现固定相和流动相的逆流流动。 ──────────────────────────── 联系人及第一作者：武斌，男，37 岁，博士，副研究员 基金项目：国家自然科学基金资助项目） 在综合考虑了现有连续逆流吸附和层析设备所存在局限的基础上，本文采用一种步进式 转盘的多柱式系统，来实现连续逆流层析操作。将各层析柱连接、组合成所需层析工艺，包 括吸附段、洗涤段、洗脱段、再生段等；通过对各层析柱液流进、出口位置的切换，来实现 固定相和流动相的逆流流动。以人血清白蛋白和卵清蛋白的混合物为实验体系，采用离子交 换载体在多柱式层析系统中进行了实验研究。 1 实验材料和方法 1.1 实验材料 人血清