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1. 动物细胞培养技术现已应用到哪些领域？请举例说明。 1). 动植物人工繁殖技术 2). 新品种培育技术 3). 生物制品生产技术 4). 细胞疗法与组织工程 2. 体外培养的细胞与体内细胞相比发生了哪些变化？ 体内细胞生长在动态平衡环境中, 体外培养细胞生存空间和营养是有限的。生存不是无限的. 1、贴附并伸展 2、接触抑制性 3、生长的密度依赖性。 3. 什么是原代培养，其生物学意义是什么？ 原代培养(Primary Culture)期.也称初代培养，即从体内取出组织细胞接种培养到第一次传代的一段时期，一般持续1~4周。 特点：细胞呈活跃移动；可见细胞分裂，但不旺盛；呈二倍体核型；与体内原组织的形态结构和功能基本相似；代表其来源组织的细胞类型及组织特异性，适合作药物测试。 生物学意义： 原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养，故更接近于生物体内的生活状态。为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段； 作为传代培养的基本条件； 可直接服务于临床实践，进行药物测试。例如，用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养，然后进行抗癌药物的筛选，根据肿瘤细胞对化疗药物的敏感性来选择最有效的化疗方案。 4. 什么是培养细胞的一代生存期？包括哪几个主要阶段？各有何特点？ 所谓细胞的“一代”是指从细胞接种到下一次再传代接种的一段时间。 包括：潜伏期、指数生长期、停滞期 1）潜伏期 特点： ①细胞有代谢及运动，但无增殖发生，少见分裂相。 ②长短与细胞接种密度、种类和培养基性质有关。 ◆原代培养细胞潜伏期约为24～96小时或更长， ◆连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期约6～24小时。 ③细胞分裂相增多时，标志细胞进入指数生长期。 2)指数生长期(logarithmic growth phase)： 特点：细胞增殖最旺盛阶段， 分裂相增多，活力最佳。 指数生长期是细胞一代中活力最好的时期，是进行各种实验最好和最主要的阶段。 指数生长期持续3～5天，细胞数量增多后生长空间变小，细胞相互接触汇合连接成片。 3）停滞期(stagnate phase) 细胞数量达到饱和，细胞停滞增殖，但仍有代谢活动，也称为平顶期( plateau）。 特点：细胞不增殖，仍有代谢活动。 培养液中的营养逐渐耗尽，代谢产物积累增多，pH降低，此时需要传代。否则细胞将会中毒,发生形态改变，细胞会从支持物表面脱落、死亡。 5谷氨酰胺在培养基中的主要作用是什么？配液时应该注意哪些问题？ ◆可促进各种氨基酸进入细胞膜； ◆所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的来源； ◆是合成ATP、ADP、AMP时所需物质; ◆是能源和碳源的来源。 谷胺酰胺应放置在－20℃冰箱保存，用前加入培养液内。在4℃冰箱内放置两周以上时重新加入原来量的谷胺酰胺。 6胎牛血清在细胞培养中起什么作用？ 1.补充培养液中没有或量不足的营养物质； 2.提供激素和各种生长因子； 3. 提供结合蛋白； 4. 含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上； 5. 对培养中的细胞起到保护作用。 7完全培养基中各成分在细胞培养中的作用分 别是什么？ 基础培养基+血清+双抗 基础培养基：维持细胞生存 血清：促使细胞生长和繁殖，利于细胞的生存 双抗：防止污染 8体外培养的细胞需要在什么环境下生长？如何获得这些环境？ 温度：36.5±0.5℃ pH：7.1~7.3 渗透压：260~320mOsm/kg 气体：95% O2和5%CO2 9细胞培养中常用哪些器材？如何对这些器材进行消毒灭菌？ 玻璃器材：高温消毒 塑料器材：高压消毒 橡胶器材：煮沸消毒 金属器材：消毒剂消毒、高压消毒 10原代取材培养时有哪些基本要求？ 1、取材要注意新鲜和保鲜； 2、取材应严格无菌； 3、取材和原代细胞制作时，尽可能减少对细胞的机械损伤； 4、仔细去除多余组织，避免组织干燥； 5、注意组织类型、分化程度、年龄等； 6、留好组织学标本和电镜标本。对组织来源、部位、供体情况做详细记录。 11组织块培养3~5天后换液的目的是什么？ 1、补充营养； 2、去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。 12细胞传代培养和细胞分裂之间有何关系？细胞传代培养1次是细胞分裂1次吗？ 答： 细胞一代中，细胞分裂多次，细胞数量增加，达到饱和密度时进行传代培养。 13.微生物的污染主要包括哪些类型？怎样判断培养的细胞污染了何种微生物？ 细菌、真菌、支原体和病毒污染。 细菌污染：培养液变混浊，胞内颗粒增多，细胞变圆脱落死亡。 真菌污染：培养液中漂浮白色或浅黄色的小点，镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝。 支原体污染：相差显微镜观察呈暗色微小颗粒，地衣红染色观察为紫色小体，附细胞外或散在细胞之间，荧光染色法观察呈绿色小点，散在于细胞