灭菌方法与生物指示剂研讨.ppt

概要 灭菌法和生物指示剂 生物指示剂的形式 无菌保证水平 灭菌工艺验证 常用灭菌方法 制药工业常用的灭菌方法 生物指示剂的使用 孢子数测定 灭菌法和生物指示剂 灭菌法 系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平的方法。 生物指示剂的形式 无菌保证水平 无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL（sterility assurance level）。 灭菌工艺验证 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求, 通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一个灭菌程序对微生物的致死性。 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作为物品是否达到灭菌的参考标志。 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试验。 常用的灭菌方法 湿热灭菌法 干热灭菌法 气体灭菌法 辐射灭菌法 过滤除菌法 不同灭菌方式不同的菌种种类的选择 湿热灭菌法 指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。 适用范围 常用的生物指示剂 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10 007、NCIMB 8157、ATCC 7953 ) D值为1.5～3.0min 生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955 ） D值为0.4～0.8min 生物指示剂的选择 干热灭菌法 指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。 适用范围 耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品的灭菌，如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等 常用的生物指示剂 生物指示剂的选择 气体灭菌法 指用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方法。在充有灭菌气体的高压腔室内进行。 环氧乙烷法 灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后，能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、—NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌体死亡。 适用范围 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固体药料及医疗器械类固体器具等不能采用高温灭菌的物品的灭菌 含氯的物品及能吸附环氧乙烷的物品则不宜使用 常用生物指示剂 气态过氧化氢法 是利用过氧化氢在低浓度的气体状态下比液体状态更具杀孢子能力的优点，经生成游离的-OH，用于进攻细胞成分，包括脂类、蛋白质和DNA，达到完全灭菌的要求的一种技术。 应用： 隔离器的验证 新设备或灌装线的调整和认证 大型或组装设备的评估 未知气体分布动力学研究 含有多个装载配置的设备认证 设备中最难灭菌位置的日常检测 生物指示剂：嗜热脂肪芽胞杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953 ) 生物指示剂的选择 辐射灭菌法 应用γ射线、β射线杀灭细菌的方法，又称电离辐射，前者由钴-60或铯-137发出，穿透力强；后者由电子加速器产生，带电荷，穿透力弱，灭菌效果差。 适用范围 不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、高分子材料、包装材料、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。 常用生物指示剂 短小芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus pumilus，如NCTC 10 327、NCIMB 10 692、ATCC 27 142)。 过滤除菌法 系利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理以除去气体或液体中微生物的方法。 常用生物指示剂 滤膜孔径为0.22μm的滤器 ：缺陷假单胞菌(Pseudomonas diminuta, 如ATCC19 146) 滤膜孔径为0.45μm的滤器 ：黏质沙雷菌(Serratin??marcescens, 如ATCC 14 756) 制药工业常用的灭菌方法 原料药： 化学合成药——较高熔点药物常用于干热灭菌法，对较