珠蚌活性成分分离中阳离子交换树脂法除蛋白质的工艺研究.pdfVIP

研究论文综述 2004年全田生物技术学术研讨会论文集 珠蚌活性成分分离中阳离子交换树魔法除蛋白质的工艺喇毫 吴皓张莉狄留庆 (江苏省海洋药物研究开发中心，南京中医药大学，南京210029) 摘要：为了确定阳离子交换树脂法除珠蚌蛋白质的最佳工艺．本文以蛋白质的清除率为指标， 采用正交试验考察上样量与树脂用量之比、样品浓度、树脂柱径高比等因素对阳离子交换树脂 除珠蚌蛋白质的影响．当珠蚌溶液浓度为1．279／ml时，上样量与树脂用量之比(v／v)为1：10， 溶液稀释6倍，树脂柱径高比为3：8．珠蚌蛋白质的清除率可以达到90％以上． 关键词。阳离子交换树脂，珠蚌蛋白质，正交试验，分离工艺 养殖珍珠的珠蚌是由学名为三角帆蚌[Hyriopsiscumingii(Lea)]、褶纹冠蚌[Cristaria 圆背角无齿蚌[Anodonta 养肝、明日、清渴、凉血等功能，治疗肝热、肾衰、斑疹、痘毒、赤眼、烫伤等症IlJ。本属动物肌肉含 副肌球蛋白．肌肽，精氨酸平氨基丁酸、乌氨酸及环核苷酸磷酸二酯酶，乙酰胆碱酯酶，鲜肌肉含多糖， 神经组织含5．羟色氨、色氨酸、异亮氨酸等，蚌泪含粘多糖、多种氨基酸及酶类。有文献报道12J，珠蚌 多糖能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，具有一定的抗炎作用p】，还具有免疫调节作用【4J。珠蚌软 体中蛋白质的含量很高。在制剂工艺过程中，探讨对珠蚌活性成分无影响且适合工业化生产蛋白质去除 方法，未见文献报道。预试验结果表明阳离子交换树脂法可以除去大部分蛋白质，方法温和，活性成分 损失少。因此，现在采用正交试验考察阳离子交换树脂法除珠蚌蛋白质的影响因素，以得到最佳工艺。 l材料与方法 1．1实验原料 Lea)的新鲜软体部分。 cumingii 蚌科动物三角帆蚌(Hyriopsis 1．2实验试剂 Na+，中国医药集团上海化学试剂公司。批号，盐酸(A．R)等。 1．3实验方法 1．3．1珠蚌软体提取液的制备 取新鲜珠蚌软体部分，清洗除去泥沙。沥干水分，绞碎。加水煎煮1小时，加水量为珠蚌软体的3倍， 上清液，备用。 1．3．2阳离子交换法除蛋白质 精密吸取一定体积的珠蚌溶液，用滴管吸取样品液，缓缓沿壁滴加到预处理过的50ml阳离子交换 液至洗脱液呈中性，70℃减压旋转薄膜浓缩。将浓缩液转移至容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀，样 20¨年全曼生塑垫查兰垄塑垒笙垄堕 塑塞望奎簦垄 __-_--__●l--_●●__--______-●_-__-_-_●-_-_--_●_-___。____●--●___-___--___。。’’1’—’。————————一一。 1．3．3正交设计 采用正交试验考察影响阳离子交换树脂除蛋白质工艺的主要因素，主要考察样品上样量、样品浓度、 树脂柱径高比三个因素的影响，每因素设计三水平，并按照L“34)正交表进行实验，结果见表l。 裹l因素水平裹 1．3．4含量测定 1．3．4．1随行标准曲线的制备 吸光度作回归方程。结果见表2。 衰2标准曲线一定 0．02675 0．079 0．079 0．079 0．26750 0．664 0．6645 O665 回归方程：C=o．4112A-0．0057 1．3．4．2样品溶液蛋白质含量的测定 将所测A值代入回归方程，换算出浓度。结果见表3、表4。 实验结果表明样品上样量有显著性差异，稀释倍数和柱径高比没有显著性差异，结合生产考虑所得 最佳工艺为AIB3CI，即室温下，当样品溶液浓度为1．279药材，ml溶液时，上样体积与树脂体积之比为1： 50，溶液稀释6倍，树脂柱径高比为2．9cm／8．Ocm，蛋白质清除效果最佳。