灵芝三萜类化合物高效液相色谱分析.pdf

灵芝三萜类化合物高效液相色谱分析﹡ 1 仪器与材料 1.1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪 四元泵 二极管阵列检测器 真空脱气机 柱温箱 自动进 样器 美国 Agilent 公司产品 软件处理 Agilent 化学工作站 色谱条件 ODS RP-C18 色谱柱 5 填料 250 4.6 流动相 5 % 醋酸- 甲醇 60 40 检测波长 252 nm 参比波长 360 nm 样品浓度 1 mg .mL 1 1.2 材料 灵芝 Ganoderma lucidum (Fr.) Karst 子实体精粉 无锡三联高科技开发有限公司提供 产地山东泰安 北京理工大学生命科学与技术学院中药现代化研究室鉴定 10 批次灵芝 TC 供 试品 由北京理工大学生命科学与技术学院中药现代化研究室制备 甲醇 醋酸均为色谱纯 无水乙醇 氯仿 碳酸氢钠等均为分析纯 0.45 μm微孔滤膜 2 试验方法 2.1 供试品制备 参照文献[12] TC 制备工艺路线大致为 灵芝子实体精粉经无水乙醇浸泡 抽滤与减压蒸 馏后 氯仿溶解 用饱和 NaHCO3 溶液提取和酸化 再经过氯仿萃取 萃取液减压浓缩干燥后 得到淡黄色固体 TC 共制备来源于 10 批次的灵芝子实体精粉原料的 10 批次 TC 样品备用 参照 中华人民共和国药典 高效液相色谱法的有关规定[13] 精确称取 TC 样品 用甲醇 配成 1 mg mL-1 0.45 μm 微孔滤膜过滤 HPLC 进样量 10 μL 2.2 相对保留时间值 α和相对峰面积值 RA 的确定 选择一个保留时间较居中且在各样品中均存在的色谱峰作为参照物 指定它的 α值为 1 分 别求出各样品中各组分的相对保留时间值 α α=tR i /tR s 其中 tR i 为各组分的出峰时间 tR s 为参照峰的出峰时间 取某一样品的色谱峰总面积为分母 各样品每个色谱峰面积为分子 求得该色谱峰的相对 峰面积比值 RA 将它标在其 α值项下 最后将各样品的 α值按小到大的次序排列成行 得 到 10 批次灵芝 TA 样品的相对保留值指纹图谱 其中无相应的相对面积 RA 时表示该样品不具 有该 α值的色谱峰 ﹡资助项目 国家重点科技项目 攻关 计划 原国家科委生命科学技术发展中心主任基金项目 作者简介 黄书铭 1963 男 安徽省蚌埠高等专科学校 副教授 在职博士生 杨新林 1967 男 教授 博导 Tel 86-10Fax 86-10E-mail xlyang@bit.edu.cn 1 2.3 色谱峰的重叠率 Overlap Ratio OR 选取参照样品为对照基准 将它的出峰数目和欲对比样品的出峰数之和为分母 两者具有 相同 α值的峰数之和为分子 以此分别求出样品的重叠率OR 2.4 稳定性试验 取同一 TC 样品 按供试品制备方法制备供试品 分别在 0 4 8 12 和 24 h 检测指纹图 谱 考察主要色谱峰的相对保留时间和峰面积比值一致性 2.5 仪器精密度试验 取同一 TC 样品 按供试品制备方法制备供试品 连续进样 5 次 考察主要色谱峰的相对 保留时间 峰面积比值的一致性 2.6 重现性试验 取同一批号 TC 样品 5 份