温敏型凝胶协助牛凝血酶原2+包涵体复性的研究.pdf

M005 温敏型凝胶协助牛凝血酶原-2 包涵体复性的研究 崔志芳 关怡新 姚善泾* （浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州 310027 ） 摘 要 利用反相悬浮法合成了具有快速响应特性的聚N-异丙基丙烯酰胺（PNIPA ）粒状凝胶，在 协助牛凝血酶原-2（pThr-2 ）复性时，其活性可由稀释复性时的1537U/mL 提高到3162U/mL 。PNIPA 凝胶作为一种非离子型的聚合物，可与复性过程中产生的大量折叠中间体之间发生疏水相互作 用，进而协助蛋白质的复性。PNIPA 凝胶快速温度响应的特性，使得其回收利用更加方便。作为 一种新型的蛋白质体外复性的添加剂，极大地拓宽了其应用领域。 关键词 重组牛凝血酶原-2 聚N-异丙基丙烯酰胺 温敏型凝胶 复性 REFOLDING OF RECOMBINANT BOVINE PRETHROMBIN-2 INCLUSION BODIES ASSISTED BY THERMO-SENSITIVE POLY(N-ISOPROPYLACRYLAMIDE) HYDROGEL CUI Zhifang, GUAN Yixin and YAO Shanjing ( Department of Chemical and Biochemical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 31002 ) Abstract The faster response poly(N-isopropylacrylamide) gel particles were synthesized by inverse suspension. When PNIPA gel was added into the recombinant bovine prethrombin-2 (pThr-2) refolding buffer, the activity was improved from 1537U/mL to 3162U/mL. By hydrophobic interaction, the non-ion PNIPA gel would interact with the intermediates and thus facilitate the protein renaturation. Furthermore, taking the advantage of temperature-sensitivity, the gel could also be easily recycled. PNIPA hydrogel could be used as an additive in protein refolding, which greatly widen the application field of the gel. Keywords recombinant bovine prethrombin-2, poly(N-isopropylacrylamide), temperature- sensitive hydrogel, refolding 引 言 凝血酶原作为凝血因子的一种，临床上可用于补充凝血因子的缺乏、促进血液凝固，激 活后可用于外科手术中的止血剂 [ 1] 。近年来研究者们尝试用E.coli表达牛凝血酶原-2 （pThr-2 ） [2]，但是得到的pThr-2 是以包涵体形式存在的，并且复性收率较低。 聚N-异丙基丙烯酰胺（PNIPA ）凝胶作为温敏型凝胶的一种，在超强吸湿剂、酶的包埋 和药物缓释等领域得到了广泛的应用[3]，目前还未有PNIPA凝胶用于蛋白质复性的相关报道。 据Lin等[4] 曾报道了采用水溶性聚N －异丙基丙烯酰胺协助β- 内酰胺酶复性，使酶的活性得以 提高。