细胞培养14-2-27.docx

双抗就是青链霉素混合液，/search?word=%E9%9D%92%E9%93%BE%E9%9C%89%E7%B4%A0fr=qb_search_expie=utf8青链霉素混合液(100X) (Penicillin-Streptomycin Solution）双抗，是专门用于细胞培养的，可以直接添加到/search?word=%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%9F%B9%E5%85%BBfr=qb_search_expie=utf8细胞培养液内。/search?word=%E9%9D%92%E9%9C%89%E7%B4%A0fr=qb_search_expie=utf8青霉素-/search?word=%E9%93%BE%E9%9C%89%E7%B4%A0fr=qb_search_expie=utf8链霉素溶液(100X)中，青霉素的含量为10000U/ml，链霉素的含量为10mg/ml。在细胞培养液中推荐的/search?word=%E9%9D%92%E9%9C%89%E7%B4%A0fr=qb_search_expie=utf8青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。双抗起的作用：/search?word=%E6%8A%97%E7%94%9F%E7%B4%A0fr=qb_search_expie=utf8抗生素，抑制细菌生长；避免细胞污染。HSC- T6系为SV40 转染 SD 大鼠的 HSC-T6（大鼠肝星状细胞系）：弃培液--以PBS液洗两次--0.05％胰酶消化--镜下观察细胞变圆（约5分钟）--以完全培液（DMEM培养基+10% FCS小牛血清）终止反应--吹打，1:3 - 1:4接种，然后继续培养。该细胞系生长速度很快，所以采用1:3 - 1:4接种，而且换液间隔不要超过48h，否则细胞容易脱落下来/view/240cc46925c52cc58bd6be77.htmlHSC-T6（大鼠肝星状细胞系）：来源于美国Friedman实验室，从建系到现在已经传了78代。HSCs， 是活化的 HSCs，能表达 α- SMA、 波形蛋白(vimentin)， 具有表达高水平 COL-Ⅰ、 TIMP- 1 mRNA特性， 该细胞系能够长期传代，传代后具有稳定的表型。道坤,梁海军,申保生,孙屹峰,乔汉臣,. 三甲益肝颗粒含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的影响[J]. 第三军医大学学报,2010,(5).免疫组化javascript:void(0)1 免疫组化的概念 免疫组化，是应用免疫学基本原理——/wiki/%E6%8A%97%E5%8E%9F抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使/wiki/%E6%A0%87%E8%AE%B0%E6%8A%97%E4%BD%93标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。2 免疫组化的分类免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。javascript:void(0)3 免疫组化实验所用的组织和细胞标本 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行/wiki/%E6%8A%97%E5%8E%9F%E4%BF%AE%E5%A4%8D抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。4 免疫组化实验所用的抗体 免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。 5 常用的染色方法 根据标记物的不同分为免疫荧光法，/wiki/%E5%85%8D%E7%96%AB%E9%85%B6%E6%A0%87免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。javascript:void(0)6 免疫组化操作步骤 1． 切片常/wiki/%E8%A7%84%E8%84%B1规脱蜡至水。如需