生物制药课件(十五章)1讲义.ppt

（2）工艺过程： 硅藻土吸附 ，0.02％氨水加0.1mol／L氯化钠洗脱。 QAE—Sephadex层析柱 去热原、色素。CM—C浓缩 。 （五）细胞色素C（Cytochrome C） 细胞色素C存在于自然界中一切生物细胞里，其含量与组织的活动强度成正比。以哺乳动物的心肌、鸟类的胸肌和昆虫的翼肌含量最多，肝、肾次之，皮肤和肺中最少。 1、组成（结构）、性质 细胞色素C是含铁卟啉的结合蛋白质，铁卟啉环与蛋白质部分比例为1∶1。猪心细胞色素C分子量12200。pI为pH10.2～10.8。 细胞色素C对干燥、热和酸都较稳定。 氧化型呈水溶液深红色，在饱和硫酸铵中可溶解。 还原型水溶液呈桃红色，溶解度较小。 2、生产工艺 （1）工艺路线： 人造沸石 pH7.5吸附 ，蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤 ，25％硫酸铵溶液洗脱 。 20％三氯醋酸沉淀细胞色素C，Amberlite IRC－50（NH4＋）树脂柱吸附 。 （六）溶菌酶（Lysozyme） 溶菌酶，又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。它广泛存在于鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，其中以蛋清含量最丰富。 溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎症。 1、组成（结构）和性质 溶菌酶是一碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰氨残基及芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。 * * 第十五章 酶类药物 ?第一节 酶类药物的原料来源 ?一、原料选择 选用原料应注意以下几点: （1）不同酶的用料选择：哪里有，含量高，选哪。 （2）注意不同生长发育情况及营养状况, 用微生物制酶，故需测其活力来决定取酶阶段。用动物器官提取酶，则与动物年龄及饲养条件有关。 （3）从原料来源是否丰富考虑； （4）从简化提纯步骤着手 （5）如用动物组织作原料，则此动物宰杀后应立即取材。 从动物或植物中提取酶受到原料的限制，随着酶应用日益广泛和需求量的增加，工业生产的重点已逐渐转向微生物。用微生物发酵法生产药用酶，不受季节、气候和地域的限制，生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。 二、微生物酶制剂高产菌株的选育 菌种是工业发酵生产酶制剂的重要条件。与增加品种、缩短生产周期、改进发酵和提炼工艺条件等密切相关。 优良菌种的获得有三条途径： ①是从自然界分离筛选： ②是用物理域化学方法处理、诱变； ③是用基因重组与细胞融合技术。因此微生物的分离筛选是一切工作的基础。 三、微生物酶制剂生产的发酵技术 首先要合理选择培养方法、培养基、培养温度、pH和通气量等。还要研究酶的分离提纯技术和制备工艺。 （—）原料 利用微生物生产酶制剂的主要原料为碳源和氮源，此外还有无机盐、生长因素和产酶促进剂等。 如果添加少量某种物质就能明显增加酶的产量时，这类物质通称为产酶促进剂。它们大多属于酶的诱导物或表面活性剂。 1、固体培养法 固体培养法亦称麸曲培养法 ，该法是利用麸皮或米糠为主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼等，加水拌成含水适度的半固态物料作为培养基 。 2、液体培养法 液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁殖和产酶。根据通气（供氧）方法的不同，又分为液体表面培养和液体深层培养两种。 3、影响酶产生的一些因素 菌种的产酶性能是决定发酵效果的重要因素，但是发酵工艺条件对产酶的影响也是十分明显的。 （1）温度 一般发酵温度比种子培养时略高些，这样对产酶有利。 （2）pH 可用糖或淀粉调节，pH低则可用氨来调节。 （3）通气（供氧）临界氧浓度 。氧必须是溶解于培养基中的氧 。 （4）搅拌 增加液体湍流速度 ，减少气泡周围液膜厚度 。有利于促进细胞的新陈代谢。 （5）泡沫和消沫剂 由于培养基中蛋白质分子排在气泡表面形成一层吸附膜，聚集成泡沫层之故 。 （6）添加诱导剂和抑制剂 诱导酶诱导酶的合成，诱导酶是该酶作用底物或者是其类似物。抑制剂促进酶的形成 。加入适量表面活性剂 。 第二节酶类药物的提取和纯化 一、生物材料的预处理 （一）动物材料的预处理 1、机械处理 用绞肉机绞，一般细胞并不破碎 。有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取，在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。 2、反复冻融 冷到-10℃左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。 3、丙酮粉 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶