第一、二章绪论及提取分离讲义.ppt

柱色谱 视频 * * * * * 酸性物质HA，使HA达到99%解离时，log [A-]/ [HA] = log 100/1 = 2 碱性物质，游离型，pH值要高2个单位，pH=pKa+2；解离型，pH值要低2个单位，pH=pKa-2 * * * * * * * 硅胶不适合碱性强的生物碱。 * * * * * * * * * * 画树脂结构,分类根据所连接的交换基团不同,分为阳离子和阴离子交换树脂. * * 根据分子大小进行分离的方法有透析法、凝胶滤过法、超滤法、超速离心法等。 * 葡聚糖凝胶系由分子量一定的葡聚糖及交联剂交联聚合而成. * 1.2 沉淀法： a、溶剂沉淀法：改变极性，如水提醇沉法 b、酸碱沉淀法：改变pH，处理酸、碱、两性成分； c、沉淀试剂：如铅盐沉淀法，酸性、酚性成分加中性PbAc2，形成沉淀。 如果在含糖或蛋白质的水提液中分次加入乙醇，使含醇量逐步达到80％以上，则难溶于乙醇的成分如蛋白质、淀粉、树胶、粘液质等被逐级沉淀析出。 a．溶剂沉淀法在天然药物化学成分分离中的应用。 水提醇沉法 难溶于水的游离生物碱遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又能重新游离使水溶性降低而形成沉淀析出；—————————————— 酸溶碱沉法 一些具有酚羟基而又难溶于水的黄酮类化合物，加碱水液可成盐溶解，经酸化后又可游离析出沉淀，借以提纯，去除杂质。———————— 碱溶酸沉法 b．酸碱沉淀法在天然药物化学成分分离中的应用。 中性醋酸铅能与具有羧基、邻二酚羟基的酸性或酚性物质生成不溶性铅盐，常用于沉淀天然药物成分中的有机酸、蛋白质、氨基酸、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂苷、部分黄酮苷、蒽醌苷、香豆素苷和某些色素等等。 c．铅盐沉淀法 往提取液中加入一种与其互不相溶的溶剂配成两相溶剂系统，利用混合物中各种成分分配系数的差异而将所需成分萃取出来的分离方法。 2. 根据物质在两相溶剂中的分配系数不同进行分离 2.1 影响分离的因素 ① 分离因子β，分配系数K K=CU/CL, （CU, CL为被分离物质在上相和下相中浓度） β= KA/ KB KAKB 根据β值的大小可决定分离采用的方法: β≥100，简单的一次萃取，可基本分离. 100β≥10，10-12次萃取，CCD法。 β≤2，100次以上萃取，DCCC法。 2. 根据物质在两相溶剂中的分配系数不同进行分离 ② pH值 对于酸性、碱性、两性化合物，pH值可改变它们的存在状态（游离型和解离型），分配比受pH值的影响，因为 * 2.2 系统溶剂萃取法（粗分） 将总提物分散于水中，依次用石油醚或环己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到相应极性的成分。 注意：防止乳化。 破坏乳化的方法 1）加热 2）将乳化层抽滤 3）长时间放置 4）加电解质（NaCl） …………——P26 2.2 酸碱性成分的分离——pH-梯度萃取法 按酸碱性强弱不同分离酸性、碱性、中性物质，改变pH值使酸碱成分呈不同状态。 2.3 逆流分溶法、液滴逆流色谱、高速逆流色谱 强酸 中强酸 弱酸 依次萃取 NaHCO3 Na2CO3 NaOH 得到 强酸 中强酸 弱酸 2.4 液-液分配柱色谱 ①正相色谱：固定相极性大，如水、缓冲液等；流动相极性小，如氯仿、乙酸乙酯等。 载体：硅胶（含水可达17%），硅藻土，纤维素等。 分离极性大或水溶性成分，如苷类、糖、生物碱等。 洗脱顺序：极性小的物质先被洗脱出来。 2.4 液-液分配柱色谱 ② 反相色谱：固定相极性小于流动相。如：HPLC反相柱，反相板。 固定相：硅胶硅醇基结合烷基，如RP-2，RP-8，RP-18。亲脂性：RP-18 RP-8 RP-2。 流动相(洗脱剂)：MeOH-H2O，CH3CN-H2O 洗脱顺序：分离脂溶性的成分，极性大者先洗脱下来。 3.1 吸附分类： 物理吸附：无选择性的吸附，吸附－解析发生迅速。吸附剂如硅胶、氧化铝、活性炭等； 化学吸附：不可逆性。如碱性氧化铝对酚酸性成分的吸附，硅胶对生物碱的吸附等。 半化学吸附：聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。 3. 根据物质的吸附性差别进行分离——吸附色谱法 重点 吸附原理：相似相吸 影响吸附过程的三要素： 吸附剂（固定相）， 溶质（被分离物质）， 溶剂（洗脱剂，展开剂，流动相） 3.2 硅胶、氧化铝： 极性吸附剂：载样量大，吸 附力强 硅胶：应用最广，适用于各 类成分分离 氧化铝：有中性、酸性、碱 性氧化铝。碱性氧化铝不适合 于分离酸性成分，多用于分离 生物碱。 层析分离 3.2 硅胶、氧化铝： ① 被分离物质吸附力与结构的关系 被分离物质极性大，吸附力强，Rf值小