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2017-03-22 发布于四川
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ResearchArticle研究报告

Acta Microbiologica Sinica 2017, 57(3): 447-458 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxbResearch Article 研究报告操纵茶树类黄酮 3′-羟基化酶生物合成 B 环-3′,4′-二羟基黄酮类化合物周天山*，余有本，肖斌，鮑露，高岳芳 712100 摘要： 3′- B -3′,4′- 4 3′- (CsF3′H) P450 (ATR) SUMO-CsF3?H[7-517]::ATR1[49-688] 3 AA SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR1[49-688] 3 AA SUMO-CsF3?H[7-517]::ATR2[75-711] 3 AA SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR2[75-711] 3 AA TOP10 DH5α BL21 12 S1–S12 3′- CsF3′H pYES-Dest52-CsF3′H WAT11 S13 3′- CsF3′H pES-URA-CsF3′H 3- CsF3H AtFLS pES-HIS-CsF3H::AtFLS 9AA WAT11 S14 SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR1[49-688] 3 AA TOP10 S6 25 °C 1000 μmol/L 287.93 μmol/L 131.76 μmol/L 188.62 μmol/L S13 1000 μmol/L 734.32 μmol/L 446.07 μmol/L 594.64 μmol/L S14 5 mmol/L 36–48 h 1412.16 μmol/L 490.25 μmol/L 445.75 μmol/L 66.75 μmol/L 73.50 μmol/L 3′- B -3′,4′- 关键词： 3′- B -3′,4′- [1] 2 (A B ) 15 [2] (C ) 基金项目： (CARS-23) *通信作者 Tel/Fax +86-29E-mail zhoutianshan@ 收稿日期：2016-08-19 修回日期：2016-12-01 网络出版日期：2016-12-12 448 B [3–5] (combinatorial biosynthesis) [6–7] [8] Tianshan Zhou et al. | Acta Microbiologica Sinica, 2017, 57(3) 4′,5′- 2 (F3′H) B 4′- A B 3′ B 3′,5′ P450 3′- 3′,5′- (F3′5′H)[11–14] 3′- B 3′ 1 12%–24% ( )[16] P450 3?3- B -3′,4′- [9–10] B 4′B -3′, 3 B -3′,4′- 图 1. B 环-3′,4′-二羟基黄酮类化合物生物合成途径[15] Figure 1. The biosynthetic pathway of B-3’,4’-dihydroxylated flavones. F3′H: flavonoid 3′-hydroxylase; F3H: flavanone 3-hydroxylase; FLS: flavonol synthase[15]. actamicro@ | , 2017, 57(3) 449 1 材料和方法 1.1 1.1.1 ) ( Col-0 –80 °C 1.1.2 Escherichia coli TOP10 E. coli DH5α E. coli BL21 Saccharomyces cerevisiae WAT11 pYES-Dest52 pES-URA pES-HIS 1.1.3 [(±)-eridodictyol] (kaempferol) (quercetin) [(±)-naringenin] [(±)-dihydrokaempferol] (dihydroquerctin) Sigma-Aldrich (USA) 1.2 TaKaRa RNAiso Plus Total RNA (Arabidopsis thaliana) (Camellia sinensis) RNA TaKaRa PrimeScriptTM RT reagent kit cDNA NCBI P450 (ATR) (FLS) 3’- (F3′H) 3- (F3H) PCR ( 1) 50 μL PCR 10 μL 5×HF PCR 4 μL dNTPs ( 10 mmol/L) 2.5 μL ( 10 μmol/L) 4 μL cDNA ( 50 ng/μL) 0.5 μL Phusion? High