文蛤糖肽MGP0501体外抗癌活性研究.pdf

藕毽In。 第三届海洋生物育技术论坛 20口5．08J9．23 文蛤糖肽(MGP0501)体外抗癌活性研究 吴杰连木张铂黄眷洪 朱学春事 吴梧桐宰 (中国药科大学生命科学与技术学院) rneretrix 摘要：目的探讨从海洋软体动物文蛤提取物中的糖肽MGP0501(Meretrix G75凝胶 GlycoPeptide)的体外抗癌活性。方法：文蛤粗提液经超滤，离子交换和Superdex 胞的抑制作用和稳定性研究。结果：MGP0501对体外培养的人肺癌细胞株(A549)，卵巢癌细 生长均有很强的抑制作用，并且对鼠源性癌细胞株(B16)有更强的抑制作用，并呈量效关 系。MGP050l有很好的温度稳定性，中性条件下抗肿瘤活性最强。结论：MGP0501具有稳定的、 广谱的抗癌活性。 关键词：文蛤糖肽；抗癌； MTI比色法 海洋天然活性物质是现代生物学研究热点，现已发现其中含有很多种抗肿瘤作用的化合 物¨’2l。随着生命科学的进展，糖蛋白的重要生物活性不断被揭示，其中海洋软体动物中糖 蛋白的显著抗癌活性已引起众多学者的关注。目前已有报道证实从海洋软体动物海兔、虾夷 meretrix 扇贝和文蛤中提取的糖蛋白具有明显的抑瘤作用¨_1。MGP0501(Meretrix Glycopeptide)为本实验室从海洋贝类文蛤中首次获得的一种糖肽活性物质，本研究探讨了 MGPos01的体外抗肿瘤活性和稳定性，为进一步研究MGP050l的抗癌作用提供实验依据。 l材料 1．1试剂与仪器 FPLC G75，快速蛋白质分离纯化仪AKTA Sepharose explorer,Pharmacia公司； 司；37。C恒温细胞培养箱，multiskan全波长酶标仪均为Thermo公司产品。 1．2细胞系 人红细胞白血病(K562)，鼠黑色素瘤细胞(B16)，人结肠癌细胞(Swlll6)均购自上海 细胞生物学研究所。 国家海洋“863”计划基金资助项目(2001AA624090) 通讯作者：吴梧桐教授，博导。Tel：025 134 疆建In。 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．i9．23 1．3药物 MGP050l为本实验室从海洋贝类文蛤提取物中纯化的糖肽。 2方法 2．1 _GP删的分离纯化及纯度鉴定 G75凝胶色谱纯化，获得纯品糖 新鲜文蛤肉匀浆、浸提后、超滤、离子交换和Superdex 肽。经SDS—PAGE考马斯亮蓝R250和阿尔新蓝染色，确定是糖肽以及分子量。 2．2 MGP删的抑癌作用时效关系 2h，24h，36h，48h，72h。 组加50pl含10％FCS的RPMll640。37℃，5％C02分别培养1 MTT液，继续培养4h，弃上清液，加DMSO min， 各孔均加20pl5mg／ml 150pl／孔，振荡10—20 值)。 按下列公式计算抑制率： 生长抑制率IR(％)=(1一A用药组，A对照组)x100％。 2．3_GP嘞，的抗癌瘤谱筛选 的时效关系试验，培养48h抑制效果最佳，所以本实验培养时间为48h。 2．4MGP哪，抑癌活性的pH值稳定性 根据2．2和2．3的结果，采用敏感性最强的细胞株A549培养48h进行pH值稳定性试验。 分别以相同pH缓冲液加培养基作为阴性对照。按照2．2法测定pH变化对MGPosol活性的影 响。