免疫学检测技术及应用解读.ppt

（二）体内法 抗原定量注入皮内，48～72小时后观察结果。 结果判定： 阳性：注射局部出现红肿、硬结，直径0.5cm 弱阳性：硬结直径0.5cm 阴性：无变化 实际意义： 阳性 —— 细胞免疫功能正常者 弱阳性或阴性 —— 多为细胞免疫功能低下者 * 常用的抗原为结核菌素(OT) 、PHA 皮内注射法 划痕法 细胞因子的检测技术 一、 生物学检测技术 依赖细胞株测定法 二、 免疫学检测技术 ELISA法 三、分子生物学检测技术 分子杂交、PCR 等检测mRNA 细胞因子检测的特点 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差 Figure 14-12 细胞因子的功能 Cell activation Cell growth and differentiation Induction of MHC Induction of cytokine receptors Promotion of antibody class- switching 影响细胞因子作用特异性的因素 Only antigen-activated lymphocytes express receptors Different combinations of receptor subunits result in low-, intermediate-, or high-affinity receptors Requirement of cell-cell interaction Short half-life of cytokines Cytokine antagonists Synergistic and antagonistic interactions among cytokines 限制细胞因子临床应用的因素 High local concentrations of cytokines during immune response cannot be mimicked clinically Short half-life of cytokines Pleiotropic effects can cause unpredictable side-effects 免疫标记技术的基本类型： （一）免疫荧光技术(immunofluorescence technique) （二）免疫酶技术(immunoenzymatic technique) （三）同位素标记技术(isotope labelling technique) （四）发光免疫测定(luminescent immuno-assay, LIA) （五）免疫胶体金标记技术(colloidal gold ／immunogold staining) （一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检抗原的存在。 免疫荧光技术包括： 直接法 间接法 间接补体增强法 Direct and indirect immunofluore-scence staining of membrane antigen (mAg). （二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques) 是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用相结合的一种方法。 主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA） 1.