SSR鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨Ⅳ.不同品种同一引物检测试验.docVIP

SSR鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨Ⅳ.不同品种同一引物检测试验 　　摘要：根据引物筛选结果，选出9个均可用SSR引物RM17检测纯度的两系杂交稻品种，通过室内鉴定判断品种间的分子学差异。同时通过田间正季鉴定判断品种间的植物学特征差异，探讨SSR引物的分辨力和可靠性。结果表明，当遗传背景较近的品种相互混杂时，用单对引物不能有效区分。 　　关键词：两系杂交稻；SSR；不同品种；同一引物；纯度鉴定；比对 　　中图分类号：S511；Q789 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4720-02 　　Study on Detection of Seed Purity of Two-line Hybrid Rice by Simple Sequence Repeat （SSR）Ⅳ. Experiments of Detecting Different Varieties by Same Primer 　　ZHAO Hong1，ZHANG Yu-fei1，LIN Mei1，LIAO Fang-li1，XIONG Xian-feng1，TU Shu-xin2，ZHANG Kai3 　　（1.Seed Administration Bureau of Jingzhou，Jingzhou 434020，Hubei，China；2. Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China； 　　3.College of Agriculture，Yangtze University，Jingzhou 434025，Hubei，China） 　　Abstract： According to primer sorting results， seeds of 9 two-line hybrid rice varieties of which the purity could be detected by SSR marker RM17 were chosen to identify their molecular differences by laboratory tests. At the same time， the discretion and dependability of SSR methods was evaluated by the morphological and biological differences in the field. It was concluded that varieties with similar genetic background could not be distinguished by only one pair of primer. 　　Key words： two-line hybrid seeds； different varieties； one pair of primer； purity identity； alignment 　　利用SSR分子标记鉴定两系杂交稻种子纯度，具有快速、稳定、重复性好、多态性明显的优点，是现在室内鉴定种子纯度应用最广泛的分子标记方法。该方法一般是从大量的引物中筛选出多态性高、共显性强，双亲谱带清晰的1对引物，然后用这1对引物来鉴定杂交稻种子的纯度[1-7]。但是往往1对引物对多个品种都具有多态性，且符合引物筛选的标准，就意味着1对引物可用于多个品种的纯度鉴定，这为筛选引物和鉴定品种提供了方便。可是如果这些品种之间发生了混杂，用目前的方法是否也能发现并得到准确的纯度鉴定结果却鲜见报道[1，8，9]。为了探讨同一引物对不同品种间混杂株的分辨率，判断单对SSR引物测定两系杂交稻种子纯度的准确性和可靠性，特开展此试验。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　本试验共用9个杂交稻品种做材料，其中天两优616、两优17、苯两优639 三个品种由湖北省种子管理局提供；丰两优香1号、荆两优10号、深两优5814、两优6326、Y两优1号、扬两优6号6个品种由荆州市种子管理局从市场上抽取商品种子，并经生产企业确认。 　　所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。 　　1.2 DNA模板制备和引物选择 　　DNA模板的制备：每个品种从田间抽取10株标准单株，用农业部推荐的简易法提取DNA，用这10株单株的混合DNA作为模板进行鉴定。 　　引物选择：选取在两系杂交种纯度检测时使用频率较高，且上述9个品种均可使用的RM17作为检测引物。 　　1.3 PCR反应体系 　　PCR扩增反应总体积10 μL ：10×buffer 1 μL，10 mmol/L dNTP 0.2 μL，50 ng/μL