食品检验技术-第三章幻灯片.pptVIP

学习重点 了解染色的基本原理。 掌握常用染料的性质及其染液的配制技术。 掌握常用试剂、缓冲溶液、物质的量浓度的 配制技术。 了解培养基的种类及一些常见培养基的用途， 掌握一般培养基的配制技术。 一、染料的种类 染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分为 酸性染料（如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸等） 碱性染料（如美蓝、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性 红、孔雀绿和番红等。） 中性（复合）染料 单纯染料 第一节 染料及染液配制技术 二、染料的使用条件 酸性染料：当培养基因糖类分解产酸使 pH 下降时，细菌所带的正电荷增加，这时选择酸性染料，易被染色。 碱性染料：菌体蛋白质电离后带负电荷，而碱性染料电离时染料离子带正电荷。因此，带负电荷的细菌常和带正电荷的碱性染料进行结合。所以，在细菌学上常用碱性染料进行染色。 第二节 常用试剂的配制技术 （一）缓冲液的配制技术 在微生物检测过程中，许多化学反应必须在一 定的pH范围内进行，为了保证反应的完成，需要寻 找和使用各种能对体系酸度起稳定作用的物质来控 制不同体系的pH。凡是能使溶液pH控制并稳定在一 定的范围之内，当有少量的酸或碱加入溶液时，仍 能控制溶液的pH不发生显著变化的试剂称为缓冲溶 液。 （一）缓冲液的配制技术 1 ．磷酸缓冲液的配制 2 ．醋酸缓冲液的配制 3 ．柠檬酸一磷酸盐缓冲液的配制 4 . 1 mol/L Tris 缓冲液 5 . 0.5mol/L EDTApH8.0 缓冲液 （二）物质的量浓度溶液的配制技术 溶液浓度表示法 （1）物质的量浓度（ mol / L ） 在生化和微生物实验中还常用 mmol / L 和μmol / L 表示溶液的浓度。 （2）质量浓度（kg / L） （3）质量摩尔浓度（mol / kg ） （二）物质的量浓度溶液的配制技术 物质的量浓度溶液的配制方法 物质的量浓度要求的精确度为 1/l00 。配制时溶质称量需用 1/l000 的天平，溶剂体积要用容量瓶定量。 （二）物质的量浓度溶液的配制技术 溶液浓度的调整 （1）溶液稀释法即将已知浓度的浓溶液稀释成 所需要某浓度的溶液。 根据浓度与体积成反比的原理进行计算配制： C1 x V1 = C2 x V2 （二）物质的量浓度溶液的配制技术 交叉法计算 设 a 为高浓度溶液的浓度， b 为低浓度溶液（或水）的浓度， c为所需溶液的浓度，应用交叉法： a b（c – b = x） c x y（a – c = y） x=所需 a 的体积， y=所需 b 的体积。 （二）物质的量浓度溶液的配制技术 溶液浓度的调整 （2）稀溶液调整为浓溶液法 仍按照溶液浓度与体积成反比的原理及交叉法计算。公式为： 注意要点： 配好的试剂溶液应该放入体积合适的试剂瓶中。 见光容易发生变化的试剂应该放入棕色瓶或将 瓶放在暗处。 试剂瓶上应贴上标签。标签上应写明试剂浓度， 缓冲溶液还应注意 pH 、试剂名称和配制日期。 （三）pH 指示剂的配制技术 酸碱指示剂通常是指随着溶液 pH 的改变而伴随着颜色变化的一类物质。这类指示剂或失去质子由酸式转化为碱式，或得到质子由碱式转化为酸式，从而发生颜色改变，所以将这类指示剂称为 pH 指示剂。在微生物鉴定、检测过程中，经常要用到此类试剂。 第三节 培养基 培养基是用人工方法，将多种物质按照各类 微生物生长繁殖所需要而配制的一种混合营 养料。食品微生物检测时，为了得到准确的 结果，需要对微生物进行扩大培养，常用到 各种不同的培养基。现在已经有用于微生物 检测的各种制备好的培养基购买。但作为食 品检验工作者仍应掌握培养基的相关理论知 识和配制技术。 第三节 培养基 培养基的分类 根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分： １）天然培养基 天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、马铃薯、牛奶、血清等。 ２）合成培养基 合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养 基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分 精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用 于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。