2015版药典修订版.docVIP

注射用A型肉毒毒素 Zhusheyong A Xing Roudu Dusu Botulinum Toxin Type A for Injection 本品系用A型肉毒结晶毒素经稀释，加入稳定剂后冻干制成。 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合现行版《中国药典》三部“凡例”的有关要求。 制造 2.1 菌种 生产用菌种应符合现行版《中国药典》三部“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1 名称与来源 生产用菌种为产毒力高的A型肉毒梭菌Hall株。 种子批的建立 应符合现行版“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.3 种子批的传代 主种子批应不超过5代，工作种子批应不超过10代。 2.1.4 种子批菌种的检定 采用明胶琼脂半固体培养基、血琼脂平板培养基、卵黄琼脂平板培养基。菌种应具有典型的形态、培养和生化特性，应产生不低于1.0×105LD50/ml的A型肉毒毒素。 种子批保存 原始种子批、主种子批和工作种子批均应冻干保存于8℃以下，工作种子批也可接种于明胶琼脂半固体培养基，8℃ 以下保存。 毒素原液 生产用种子 启开工作种子批菌种复苏后，在明胶琼脂半固体培养基上扩增培养，制备生产用种子。 产毒培养基 采用含胰酶消化酪蛋白（来源！猪源性？牛源性？非疯牛病疫区？）、建议不加具体成分，去除括号内的内容，只规定培养基名称即可。酵母透析液（或酵母浸出粉）、葡萄糖培养基，或经批准的其他适宜培养基。 建议不加具体成分，去除括号内的内容，只规定培养基名称即可。 接种和培养 生产用种子接种产毒培养基后，在适宜温度培养一定时间。每瓶取样镜检，应无杂菌，经除菌过滤，即为原制毒素，其毒力应不低于1.0×105LD50/ml。 结晶毒素 2.2.4.1 纯化及结晶 原制毒素可经酸沉淀、离子交换柱层析、硫酸铵浓缩和透析及自然结晶等程序（工艺），或用经批准的其他适宜方法进行纯化。纯化毒素经自然结晶后即为结晶毒素。 2.2.4.2 保存 于2～8℃避光保存。 2.2.4.3 结晶毒素检定 按3.1项进行。 透析 用适宜缓冲液溶解结晶毒素，经透析去除硫酸铵，除菌过滤后即为原液。 原液检定 按3.2项进行。 半成品 配制 用生理氯化钠溶液或其它适宜稀释液将已知毒力的毒素溶液稀释至适当浓度，加入适宜稳定剂成分比如：明胶（猪源性?牛源性?）右旋糖酐、蔗糖不要加稳定剂的具体成分为好！中，使每1ml毒素溶液的毒力在规定范围内。 不要加稳定剂的具体成分为好！ 半成品检定 按3.3项进行。 成品 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 分装及冻干 应符合 “生物制品分装冻干规程”及附录Ⅰ A有关规定。在冻干过程中制品温度应不高于35℃，真空下压塞。 规格 每瓶含A型肉毒毒素50U、100U。 包装 应符合“生物制品包装规程” 及附录ⅠA有关规定。。 3 检定 结晶毒素检定 结晶毒素在普通光学显微镜高倍镜下观察，应呈均一的针状或棒状结晶。 毒力测定 可选择下列一种方法进行。毒力应不低于1.0×106LD50/ml。 3.1.2.1 本品溶解透析后做适当倍数稀释，按Broff法测定毒力，计算出本品的毒力。即取体重18～20g SPF级昆明小鼠5只，每只尾静脉注射0.1ml本品（或稀释的供试品），求其平均死亡时间（以分钟计），从毒素剂量与死亡时间的标准曲线中求得毒素的毒力。 3.1.2.2 按常规方法稀释本品，各稀释度腹腔注射体重18～20g小鼠4只，每只注射0.5ml，根据动物4天内死亡情况，用统计学方法（Reed Muench法）计算本品的毒力。设参比品组和供试品组，起始浓度？组距？5个剂量组？用概率单位平行线测定法求试验组效价。可以规定设有效稀释剂量应不少于3组，其他不必规定 可以规定设有效稀释剂量应不少于3组，其他不必规定 纯度测定 3.1.3.1 根据波长280nm处吸光度计算的蛋白质浓度及3.1.2项测定的毒力，求出结晶毒素的纯度，每1mg蛋白质纯度应在1.0×107LD50以上， 3.1.3.2 波长260nm处吸光度与波长280nm处吸光度之比（A260/A280）应不高于0.6。 特异性检查 取注射用水1ml，溶解A、B、C、D、E、F和混合型冻干肉毒毒素诊断血清，分别于各血清管中加1ml含100LD50左右的本品。另取2支试管，各加1ml生理氯化钠溶液，再分别加入上述同浓度的本品溶液，其中1支煮沸20分钟作为毒素阴性对照，另1支与混有毒素的诊断血清管同时置37℃结合45分钟，作为毒素阳性对照。各组分别腹腔注射体重18～20g小鼠2～3只，每只注射0.5ml，观察4日内小鼠死亡情况，A型肉毒毒素判定标准：A型、混合型和阴性