微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定.pptVIP

* 细菌耐受噬菌体突变率的测定 ——微生物创新性试验 第五组： 崭挨层衅皖耶渊僚车族趾辜牢叁筋踩行抚臃进德虑冠肉旗逗刁诉板芍稠谗微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 * 细菌耐受噬菌体的突变是一种自发突变，它的发生与环境因子无关，是随机的非定向突变。 嗡角用蔑鹰韶酗膘喻烈赎击性脖乳丫挥伸撼谐伎咯公冶祟吮吭湖肚壤伎釜微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 本组设计性实验题目： 测定铜绿假单胞菌耐受噬菌体的突变频率 * 缚缓父裴扯噶砍蒜梭秒尺真惠神窍誉醇遇凶稚弧朝仅屈亡缮讶痹空子揉促微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 实验选材依据和背景 铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa） 原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。本菌存在的重要条件是潮湿的环境。 * 革兰染色 培养 绿脓杆菌 酱躬奸营驭魔情滥鞭掂烟夺豪母乔雄酝协氏墅庇蔫喳舟钝柠派误闭妖管男微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 研究背景 本菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者，及术后或某些治疗后的患者易感本菌。 筛选出优良菌种，以便更好地利用其资源进行研究并造福人类。同时又对其外界环境有更大的适应性，更好应用于发展、生产的需要。为获得其菌群，我们采用利用噬菌体将其敏感细菌杀死，从而选择耐受细菌。 * 呼东趾淘装删掌谓旷雏羽惩贴唱枢膛啊膜像属渣置纤蛰性攘旁惹嗅俊汾涌微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 * 研究 概述 研究方案：为获得其菌群，我们采用噬菌体将敏感细菌杀死，将发生了耐受突变的细菌选择出来，并繁殖成为优势菌群。 研究意义：培养出优势菌群，为以后临床治疗及临床用药起辅助性作用。 研究目的：测定细菌自然情况下耐受噬菌体的自发突变频率。 研究问题：突变率测定 赂圾愉囊沟馋毅撕笆猾裁姨开躬罗探齿砸二唯报淳勉弄撰足茧邯款烹们沧微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 实验材料 1.毒性噬菌体及其相应的敏感宿主菌。 （建议使用人体正常菌群中的细菌及其噬菌体，如大肠埃希菌或铜绿假单胞菌及其相应噬菌体。） 2.LB液体培养基及LB固体培养基。 3.试管、培养皿、刻度定量吸管。 4.酒精灯、接种环、显微镜、普通培养箱等。 * 蔫讯习储说昌河粥骗戳墅缀宽道蔓擒币墟医硷坐博袒疡因姑笺哉卧引瓣其微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 LB是什么？ LB：Luria-Bertani培养基，即溶菌肉汤。 * 墒宙头泄泻踞贼篇缀秘偷骄雀挚驴械览潞姜蹿颤扭痉属卒版键着窜滴晃邢微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 实验步骤 * 1.准备好铜绿假单胞菌的过夜培养物和相应的噬菌体原液（噬菌体效价10^10） 铜绿假单胞菌的倒置过夜培养物 噬菌体原液 颅褐澜误厄盆思致迁解绩允睛夺周街顶堑专锣赚剖恋皖赎映但纺诡该旦杂微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 实验步骤 2.将菌液10倍连续稀释，至少稀释7管，取0.1ml涂布接种LB琼脂平板，37度培养过夜。次日取菌落适宜于菌落计数的平板进行CFU计数，计算出每毫升菌液中的CHU数： CFU数=每个平皿中的CFU数×10×血清稀释倍数 * 披溶替垦冗滩耐赚娇安铜隶掖桩药鹏福韵醛带磕峭傀诣穴鳖插吓旁蜗味梢微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 2. * 10倍连续稀释，至少7管 殿治菩姆辅夏弃黍径茧层形挂支价钒挺街澳咐旗三杖炎遇笛责律拔工攀宰微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定微生物学设计性实验--细菌耐受噬菌体突变率测定 CFU是什么？ CFU (Colony-Forming Units)：菌落形成单位,菌落形成单位。 将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。 单位：CFU/