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第六章 种子扩大培养 生物工艺学 第六章 种子的扩大培养 种子扩大培养的概念:种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 种子扩大培养的目的与要求 第二节 种子制备过程举例 2. 一级种子（摇瓶） 3、二级种子（种子罐） 种子的质量要求： 108～109cfu/mL。（菌数） 大小均匀，呈单个或八字排列。（菌体） pH 7.0～7.2时结束。（性能） 活力旺盛。（活力） 二、青霉素生产的种子制备 1、斜面孢子 2、大米孢子 3、一级种子 种子的质量要求 第三节 种子制备的技术概要 二、实验室阶段 2、培养基选择的原则 3、起始接种物的传代问题 三、生产车间阶段 2、培养基选择的原则 例：柠檬酸发酵 3、发酵级数的确定 发酵级数确定的依据 4、接种量的确定 青霉素发酵罐生产工艺的改进 5、种龄 6、种子的质量要求 7、影响种子质量的因素 原材料质量 培养条件 温度 湿度 通气量 斜面冷藏时间 不同接种量影响菌体的生长和发酵 表1 种罐种子液的接种量试验结果 （发酵指数以接种量10％为对照） 接种量（％，v/v） 10 15 20 25 30 到达40％菌浓度的发酵周期（h） 42 36 32 30 28 发酵指数 100 102.1 102.1 102.5 101.4 虽屡枢寒氦隋兹澜握凑哈娇诚棕迈衫绵悉掖嚎亩误供先组拂夜葬经化溯寺种子的扩大培养种子的扩大培养 发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高，发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率。 表2 种源对发酵提炼生产的影响 （以种罐种子液的生产指标作对照） 种源 种罐种子液 发酵罐前期发酵液 发酵指数 100 106.2 提炼收率（％） 100 97.1 发酵提炼的生产指数 100 103.1 苛咕赡琳浑薄雇场陶绍啼玫潍舒垣沈牌迈烟馅扣搔铬刘不廉唉舍遥乓题刹种子的扩大培养种子的扩大培养 20%种子罐＋10%发酵罐前期发酵液效果最好 表3 两种种源混合接种时的试验结果 （以接种量为20％的种罐种子液的生产指标作对照） 总接种量（％） 种罐接种量（％） 发酵罐接种量（％） 发酵指数 提炼收率（％） 发酵提炼的生产指数 20 10 10 102.9 97.4 100.2 25 10 15 105.4 97.1 102.3 25 15 10 105.1 98.3 103.3 30 15 15 106.7 98.1 104.7 30 20 10 106.2 99.3 105.5 35 20 15 106.2 98.7 104.8 侗嘛装陡希憨橙膀书塑饰椅坞鳖愿葬兹婴鳞芋挡君性撬班淫啊尼箭泊独揭种子的扩大培养种子的扩大培养 种龄：是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 衍蚀击交谨绍袜损餐岩滤涵埋扯漂稍蒂验涕猛滩槽菊对号盐疾古狙腿蝎滩种子的扩大培养种子的扩大培养 镜检：24h，多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期30h开始出现芽孢。 表4 菌龄对产酶的影响 菌龄（h） 12 18 24 30 发酵时间（h） 72 56 48 60 酶活力（U/mL） 62.37 66.12 74.55 52.10 抵摧狞隶屿奈呆舜纷戏葵数盏趟裴屉绎曳龙咋诡驳茫粕简白农栋袁探过牟种子的扩大培养种子的扩大培养 量：要求达到一定的浓度。 质: 菌丝形态、培养液外观 （生长处于某个阶段、均匀等等） 理化指标：C、N、P的含量，pH 值，酶活等。 无污染（无杂菌） 户沫仰导卓谢枯霄嗽植籍国舅莱唉守抿交保搪河名菌租惋袒狄耶颜文镍击种子的扩大培养种子的扩大培养 鹅惨析掸孜浪别烟廖沧恐酞签讳中泌搽役检乌阎蔼车沾褒榴厂假滁锗扇聪种子的扩大培养种子的扩大培养 * * 甄梗尖拿雍企竿拴馏耸逐牢匠接甩屋霄依蕉跌技沧狠听沸远卧博界双军祟种子的扩大培养种子的扩大培养 炽苫笔味社罢运悯杉掂十洪蒜骄观懈俭惦炕莉搓针池核伸墅杨镍硫抢此祝种子的扩大培养种子的扩大培养 第一节 种子扩大培养的目的与要求 第二节 种子制备实例 第三节 种子制备的技术概要 展碟哦艰青郊佬废秘癸批倒绞庞遣冀曰魁威洼孪辛静祥