淡紫拟青霉胞外多糖的分离、纯化及结构分析.doc

增加淡紫拟青霉多糖淡紫拟青霉多糖结构史怀1，朱育菁1(，刘波1*（1福建省农业科学院农业生物资源研究所，福建福州 350003） 摘要：采用乙醇沉淀法从淡紫拟青霉NH-PL-03菌株发酵液中提取粗多糖，经Sevage法脱蛋白后，过Superdex-G75凝胶层析柱分离得到含量较大的组分EP-1，紫外分光法及和Sephacryl S-200 HR凝胶层析柱检测EP-1为均一多糖，Sephacryl S-200柱层析测得EP-1的分子量为35.2kd，完全酸水解后纸层析检测EP-1的单糖组成中仅有葡萄糖，红外光谱、高碘酸氧化和Smith降解结果表明EP-1的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖 关键词：淡紫拟青霉；多糖；结构分析 Isolation, purification and structure analysis of the polysaccharide from Peacilomyces ilacinus SHI Huai1, ZHU Yujing1, LIU Bo1* (1Agricultural Biological Resources Research Institute， Fujian Academy of Agricultural Sciences，Fuzhou，350003, China) Abstract: Polysaccharide was isolated from the fermentation broth of Paecilomyces lilacinus NH-PL-03 strain by ethanol depositing. The protein were removed by Sevage method, and the pure sample EP-1 was separated by Superdex G-75 column chromatography. The EP-1 was a homogeneous pure polysaccharide confirmed by UV-spectrometer and Sephacryl S-200 HR chromatography, and its molecular weight was 35200D. EP-1 was composed of only glucose, which was proved by paper chromatography analysis after complete hydrolysis of the pure sample by sulfuric acid. And the chemical structure of EP-1 was indicated as kind of liner glucan linked by β-(1,3) linkage. Key Words: Paecilomyces lilacinus; polysaccharide; structure analysis 淡紫拟青霉[Paecilomyces lilacinus（Thom）Samson ] 属半知菌纲、丝孢菌目、拟青霉属，对多种植物寄生线虫有着良好的防治效果[1，2]、此外还具有杀虫[3]、促长[4]、拮抗[5]、降解[6]等多种功效，是一株极具推广潜力的生防菌与功能菌。但就现状而言，国内对淡紫拟青霉的利用基本还停留在以菌治虫、以菌治菌的程度上，对菌株所产生的各种次生代谢物的提取及结构、功能等深层次的研究十分薄弱。本实验室在先期工作中筛选到一株对尖孢镰刀菌具有拮抗抑制作用的淡紫拟青霉菌株NH-PL-03，对抗性物质进行了初步的筛选分析，结果表明其抑菌活性来自胞外多糖的粗提物[7]。 淡紫拟青霉微生物多糖是目前生物发酵工程和生物医药领域的一大研究热点。多糖及其复合物在生命活动中有着极其重要的生物功能，主要集中在抗感染、抗肿瘤、抗风湿、抗消化道溃疡和增进免疫功能等方面实验与应用。但由于多糖本身的结构复杂，很多特殊的生物活性都与其复杂的空问结构关系密切，因此对多糖结构的研究是开发糖类的关键。 本研究对淡紫拟青霉胞外多糖进行提取、分离、纯化后，多糖的结构，明确其抑菌机理。 1 材料与方法 1.1 材料 菌种：淡紫拟青霉NH-PL-03菌株 发酵培养基：查氏培养基（蔗糖 3％，NaNO3 0.3%，KCL 0.05%，MgSO4 0.05%，KH2PO4 0.1%，FeSO4 0.001%) 试剂：葡萄糖、果糖、木糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖标准品均为Sigma公司产品，层析分离材料Superdex G-75、Sephacryl S-200 HR葡聚糖凝胶均为Pharmacia公司