微生物实验(实验二稀释平板测数).ppt

微生物学实验 实验二（P74) 微生物测数——稀释平板测数法 一、实验原理 微生物测数：测定各类样品中微生物的数量。 土壤、食品、微生物制品（菌肥、农药等） 微生物测数方法 D B C A 稀释平板测数法 显微镜直接计数法 比 浊 法 滤膜浓缩法 稀释平板测数法原理： 又叫平板菌落计数法。 将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单 个细胞，取一定量稀释样液接种到平板上。经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表 原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和接种 量即可换算出样品中的含菌数。 优点：能够获得活菌的信息；对环境微生物分离纯化。 缺点：受多种因素限制，计数的结果比实际含菌量偏低。 以小组为单位，用实验一准备的物品、采用稀释 平板测数测定土壤样品中的细菌、放线菌、真菌 的 数量。 学习无菌操作（接种、菌液稀释、倒培养基）的 基本方法。 二、实验内容 三、实验方法 1.编号 （培养皿 无菌水） 3.接种 （倾注法、涂板法） 4.倒培养基，制备混菌平板 2.制备 样品稀 释液 5.培养 30℃，培养箱倒置培养 6.数菌落、计算 稀释平板计数法操作流程 马丁氏培养基 接种液稀释浓度： 细菌：10﹣4、10﹣5、10﹣6 放线菌：10﹣3、10﹣4、10-5 真 菌：10-2、10-3、10-4 每组每个稀释度作2个重复，共6个人平板 四、实验结果观察与计算 菌落计数 培养后取出培养平板，计数平板上的菌落数,计算出同一稀释度2个平板上的菌落平均数。 计算 含菌量（CFU）/g(ml)鲜样=（计数皿平均菌落数×计数皿稀释倍数）÷接种量 含菌量（CFU）/g(ml)干样= CFU /g(ml)鲜样×样品水分系数 样品水分系数=1/(1-样品水分含量) CFU： colony forming units，菌落形成单位 计算菌落总数方法例举（细菌） 注：计数皿选择平均菌落数范围为：细菌、放线菌30—300个/皿、真菌10—100个/皿。含菌量（ CFU）结果采取4舍五入、保留2为有效数字。 计数皿的选择方法 1.只有一个稀释度的平均菌落数符合范围： 选择该稀释度计算含菌数。 2.两个稀释度的菌落数符合范围： 高稀释倍数菌落数×稀释倍数 低稀释倍数菌落数×稀释倍数 比值2 ，取两个稀释度计算CFU的均值；比值2，取稀释倍数较低的菌落平均数计算CFU。 3.所有的稀释度平均菌落数300或100： 按稀释倍数最高的平均菌落数计算。 4. 所有的稀释度平均菌落数10或30： 按稀释倍数最低的平均菌落数计算。 计算：  五、实验作业 《微生物实验报告册》P3：1; P4: 3; P5:1-3 培养基、培养条件；土壤团粒吸附；环境中的大多数微生物为不可培养，能在人工培养基上生长的仅为0.1-5%。 培养基、培养条件；土壤团粒吸附；环境中的大多数微生物为不可培养，能在人工培养基上生长的仅为0.1-5%。