蛋白酶k水解蜂王浆蛋白的研究（.docVIP

蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的研究(尚刘佳霖高丽娇 （重庆市畜牧科学院，重庆荣昌 402460）摘要：为不同蛋白酶水解蜂王浆的效果，本研究以蛋白酶K为试验用酶，对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及水解产物稳定性进行了研究。结果显示，蛋白酶K水解蜂王浆的最佳条件为温度55℃，pH 7.5，酶添加量60 μg/mL，氯化钙添加量0.01 mol/L，反应时间4 h；蛋白酶K水解产物在酸、碱、热条件下能够保持较高的稳定性。蛋白酶K水解蜂王浆的效果介于植物性蛋白酶及动物性蛋白酶之间，可用于生产富钙型的水溶性蜂王浆。 关键词：蜂王浆；蛋白酶K；水溶性蛋白质提取率；正交试验 Study on the Hydrolysis of Royal Jelly Protein by Proteinase KAbstract：For studying different protease hydrolysis of royal jelly, water-soluble royal jelly was produced by proteinase K which used for biochemical test, and the optimal hydrolysis conditions of proteinase K and stability of enzymatic hydrolysates were studied in this paper. The results showed that the optimal hydrolysis of proteinase K was 55℃, pH 7.5, proteinase K 60 μg/mL, CaCl2 0.01 mol/L，and time 4 hextraction rate 31.03%. The stability of enzymatic hydrolysates was better. The effect of proteinase K hydrolysis of royal jelly was between plant proteinase and animal proteinase. Proteinase K could be used in the production of rich calcium type of water-soluble royal jelly. Key words: royal jelly; proteinase K; extraction rate of water-soluble protein; orthogonal experiment 中图分类号： 文献标志码： 文章编号： 蜂王浆是的保健滋补品，含有丰富的营养物质，现代医学及营养学均认为蜂王浆对人体具有极强的营养保健功能和医疗作用[1,2]。新鲜蜂王浆的成分十分复杂，含有水分60%-70%、蛋白质12%-15%、脂质3%-6%、糖类10%-16%，其他的维生素、氨基酸及矿物质占2%-3%。其中，蛋白质在蜂王浆的干物质中含量最高，约30%-50%，并含有高生物活性的酶及多肽[3,4]。根据研究显示，丰富的超氧化物歧化酶（SOD）、转氨酶、胆碱酯酶、抗菌肽及多种王浆主蛋白（ajor royal jelly proteins，MRJPs）是蜂王浆抗衰老、抗肿瘤、抗菌、调节免疫力及促进细胞增殖的重要基础，是蜂王浆医疗保健功能的最主要承担者[1-3,5-16]。然而，极差的蛋白质稳定性及酸涩辛辣的不良口感是制约蜂王浆产业进一步发展的关键问题[17,18]。目前，研究人员主要通过酶解改性技术，采用植物蛋白酶或动物蛋白酶改变蜂王浆蛋白的分子量排布，在基本维持蜂王浆营养保健功能的基础上，改善蜂王浆的理化特性及感官指标，该技术能够提高蜂王浆的溶解性、稳定性及适口性，为蜂王浆产品的深度开发及利用提供技术与思路[19-21]。 蛋白酶K属于丝氨酸蛋白酶类，是林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）的一类蛋白酶，主要应用于分子生物学及细胞生物学等相关生化试验，在提取组织DNA及RNA的过程中具有十分重要的作用[22-24]。相比于传统酶解改性技术使用的酶类，蛋白酶K通过白色念球菌进行生产[22]，具有统一的生产规格、稳定的水解活性及成熟的反应条件及反应体系，而氯化钙作为蛋白酶K的稳定剂也能在蜂王浆产品的开发利用中同时使用，以获得富含钙离子的高附加值产品。因此，本研究以水溶性蛋白质的提取率为主要指标，对蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的工艺条件及酶解产物的酸、碱、热稳定性进行研究，旨在解决蜂王浆稳定性差、溶解性低等问题，并评价不同类型蛋白酶在提高蜂王浆稳定性及水溶性方面的具体效果，