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鼻咽癌细胞中LMP1激活端粒酶 机制探讨及对凋亡的影响 广东医学院病理教研室 研究生：赵同伟 导师：陈小毅 教授 主要内容 ◆立题依据 ◆研究内容 ◆技术路线 ◆预期结果 ◆研究进度及实验安排 ◆经费预算 立题依据 ◆ LMP1信号传导通路与端粒酶激活 ◆ LMP1对凋亡的影响 ◆反义LMP1问题 LMP1与NPC ◆LMP1具有转化能力。 ◆LMP1在NPC患者中均有较高的检出率。 ◆LMP1基因是EB病毒的重要的致瘤基因。 ◆LMP1与NPC的研究涉及许多领域。 一、LMP1信号传导与端粒酶激活 ◆（一）LMP1的结构 ◆（二）LMP1的信号传导通路 ◆（三）LMP1信号传导与端粒酶的激活 （一）LMP1的结构 ◆LMP1是跨膜蛋白，包括三个功能不同的结构域。 ◆羧基端胞浆域是LMP1的基本功能区。 羧基端胞浆域 ◆CTAR1诱导低水平的NF-kB。 ◆CTAR2诱导高水平NF-kB。 ◆CTAR3位于CTAR1与CTAR2之间，可激活JAK/STAT通路。 （二）LMP1的信号传导通路 ◆LMP1蛋白的信号传导不需要配体，传导途径和CD40类似。 ◆胞浆的羧基端胞浆域相互凝集，而后和相关蛋白结合而激活NF-kB 、AP-1及STAT等信号传导通路。 LMP1与NF-kB通路 ◆通过TRAFs、TRADD途径激活Ik激酶，使IkB磷酸化，导致IkB/NF-kB水解分离，NF-kB转位至核内，发挥功能。 NF-kB通路效应 ◆上调凋亡抑制基因A20、bcl-2、bfl-1和CIAPS； ◆一定范围内诱导鼻咽上皮端粒酶表达。 ◆上调VEGF和MMP9，改变CD40、CD54等。 LMP1与STAT通路 ◆LMP1已被证实可以激活JAK/STAT通路。 ◆Chen H等发现LMP1的表达提高了Hela-Bax、CNE2-LNSX及CNE2-LMP1细胞磷酸化的STAT3和STAT5水平。 JAK/STAT通路效应  ◆参与基因的转录和多种细胞功能如增殖、凋亡和诱导细胞表面标志的表达。 ◆提示LMP1激活的JAK/STAT通路可能参与了鼻咽癌的发病过程。 LMP1信号传导模式图 （三）LMP1信号传导与端粒酶激活 端粒酶与肿瘤 ◆已证明，约90%的恶性肿瘤组织都存在端粒酶的活性。 ◆端粒酶的激活被认为是细胞逃逸衰老和危机期而永生化的机制之一。 LMP1与端粒酶 ◆杨静课题组端粒酶实验三步曲 ◆LMP1表达提高了端粒酶的活性，提示LMP1可以激活端粒酶。 ◆在LMP1水平最高时端粒酶的活性下降，提示LMP1可能通过不同的机制实现对端粒酶的调控，不同的表达水平各种机制所起的作用可能不同。 ◆◆LMP1可以通过激活NF-kB激活端粒酶。 思考： ◆NF-kB激活后，通过什麽靶基因来激活端粒酶哪？这是本课题研究的核心。 ◆有无其它激活机制？ 类比文献 ◆McMurray HR等发现HPV-16 E6通过c-myc对hTERT的转录激活提高了端粒酶的活性。 ◆LMP1和E6/7蛋白作用有很多相似性。 假设成立吗？ ◆LMP1 NF-kB、JAK/STAT c-myc hTERT mRNA 端粒酶 ？ ◆端粒的长度哪？ 假设通路相关文献 LMP1与c-myc ◆孙宁、陈小毅等体外EBV感染人胚胎鼻咽上皮，发现c-myc被激活。 ◆Chen H等发现在CNE2-LMP1及Hela-Bax中LMP1的表达提高了c-myc的表达。 NF-kB与c-myc ◆c-myc基因上有NF-kB结合位点，即URE和IRE，NF-kB可反式激活c-myc。 ◆Duyao MP、Kessler DJ等人发现，HLV-1Tax蛋白通过NF-kB反式激活c-myc。 JAK/STAT与c-myc ◆Chen H等也发现在永生化的B细胞中及鼻咽癌细胞CNE2-LMP1中JAK/STAT的激活可以提高c-myc的表达。 ◆有力支持！ c-myc与hTERT的转录、端粒酶的激活 ◆hTERT被认为是端粒酶的催化亚基，hTERT转录水平及表达水平的提高可以激活端粒酶，提高端粒酶的活性。 二、LMP1对凋亡的影响 凋亡与肿瘤 ◆多数肿瘤细胞中均存在凋亡的异常。 ◆肿瘤的发生和发展是增殖和凋亡动态平衡破坏的结果。 ◆凋亡与肿瘤的研究目前仍集中在表达异常凋亡的活化与抑制基因领域。 LMP1对凋亡的影响 ◆LMP1