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流动注射时间扫描荧光分析法测定青霉素V钾 高瑞，马红燕* (延安大学化学与化工学院，分析化学研究所，延安716000) 摘 要: 研究了硫酸颜色反应用于青霉素V钾荧光测定的新方法。青霉素V钾为弱荧光物质，与浓硫酸反应后荧光显著增强。结合流动注射进样技术，借助时间扫描荧光方式，提出了流动注射时间扫描荧光分析法测定青霉素V钾的新方法。在最大激发236.0nm、最大发射波长306.0nm处，青霉素V钾浓度在3.6×10-5g/L~4.0×10-2g/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系，相关系数为0.9999。方法检出限为1.0×10-5g/L，相对标准偏差为0.6%（n=11, c=1.0×10-3g/L），进样量为0.18mL。方法简单、灵敏，用于药物及尿样中青霉素V钾的测定，结果满意。 关键词: 青霉素V钾；流动注射分析；时间扫描；荧光光度法 中图分类号：O657.3 青霉素V钾（Phenoxymenylpenicillin potassium，PMPP）是苯氧甲基青霉素的钾盐，为β内酰胺类药物，在临床上有重要用途。其测定方法有：高效液相色谱法[1]、毛细管电泳法[2]、伏安法[3]和原子吸收光谱法[4]等，以荧光分析法直接测定青霉素V钾尚未见文献报道。流动注射可在非平衡的动态条件下进行，从而大大提高了分析速度 [8]。我们在研究青霉素V钾荧光性质的工作中，发现浓硫酸的加入，可与青霉素V钾发生颜色反应，使其荧光强度显著增强，据此，结合流动注射进样技术，借助时间扫描荧光方式，提出了流动注射时间扫描荧光分析法青霉素V钾的新方法。方法操作简便、灵敏度高、分析速度快，用于药物制剂及尿样中青霉素V钾的直接测定，结果满意。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 F-4500型荧光分光光度计（日本日立）；IFIS-C系列智能流动注射进样器（西安瑞迈分析仪器有限公司）。 青霉素V钾标准溶液：1mg/mL，称取0.1000g青霉素V钾对照品（中国药品生物制品检定所），加入2.00mL浓硫酸，搅拌反应，用水定容于100mL容量瓶中。使用时逐级稀释。 Britton-Robinson缓冲液：在100mL三酸混合液（磷酸、乙酸、硼酸浓度均为0.04mol/L）中加入一定体积的0.2mol/L NaOH配制，并在酸度计上调节pH=5.72。 所用试剂均为分析纯，水为二次亚沸石英重蒸水。 1.2 实验方法 启动F-4500型荧光分光光度计，输入所需参数，开动FIA。按图1所示流路，在选定的条件下，以2.2mL/min的速率进pH=5.72的Britton-Robinson缓冲液，待基线平稳后，通过进样阀nm和发射波长306.0nm处 ，用时间扫描方式测定相对荧光强度（狭缝宽度为5nm）。 2 结果与讨论 图1流动注射荧光法测定青霉素V钾流路图 Fig.1 Schematic Diagram of flow-injection fluorometry for the determination of P1,P2-蠕动泵（Peristaltic pump）；3-进样阀（Injecting valve）；4-管（） Sample-青霉素V钾溶液（Solution of ）；C-载液Carrier solution (=5.72的)；Waste（废液）；2.1 荧光激发与发射光谱 nm，荧光强度显著增强。实验选择激发波长为236.0nm，发射波长为306.0nm。 图2 激发光谱和发射光谱 Fig.2 The excitation sepctra and the emission sepectra 1- PMPP的水溶液+缓冲溶液；2-PMPP浓硫酸反应后的产物+缓冲溶液 2.2 载液的选择及pH的影响 2.3浓硫酸的用量表面活性剂的硫酸2.4 流动注射参数的选择 .2mL/min，进样流速为1.8mL/min，进样量为0.18mL，混合管长度为50cm。 2.5 工作曲线、精密度及检出限 ΔF=6.43×104 c（g/L）+1.78；相关系数r为0.9999。图4为流动注射时间扫描荧光信号图。对含量为1.0×10-3g/L青霉素V钾标准溶液进行11次平行测定，相对标准偏差为0.6%。根据IUPAC的测定，以3S0/S计算，方法的检出限为1.0×10-5g/L。 图4 流动注射时间扫描荧光信号图 Fig . 4 Time scanning response signal of the flow injection fluorophotometric method 青霉素V钾浓度： 1-0.0036g/L 2-0.012g/L 3-0.04g/L 2.6 共存的影响 2.7 反