第十四章肝功能检验.pptVIP

第十四章 肝功能检验 第一节 概 述 第二节 某些肝疾病 的临床生化 第三节 肝功能试验 第四节 肝功能试验 选择原则 第四节 肝功能试验的用途及评价 本章小结 （1）体系中α-酮戊二酸的显色 但吸收光谱与丙酮酸苯肼有所不同，在490nm左右，丙酮酸苯肼为α-酮戊二酸的2倍，减少底物中α-酮戊二酸的量， α-酮戊二酸仅为丙氨酸的1/100。 （2）产物旁路 如AST作用生成的丙酮酸有3种去路，一是与2.4-二硝基肼显色，二是作为ALT底物生成丙氨酸，三是被内源性LDH消耗生成乳酸。 （3）赖氏法 没有自己的单位，根据大量实验数据将比色结果换算成卡氏单位，其结果与酶联-紫外监测法接近。 卡氏法（Kanmam）单位定义，1ml血清，反应液总量3ml，25℃。1cm直径每分钟对340nm吸光度减少0.001为一个卡氏单位。 3.临床意义 ALT是临床诊断急性病毒性肝炎灵敏性和专一性较好的指标，早期阳性率达80％～100％，中毒性肝炎ALT上升亦早于其他肝功能试验，慢性肝炎ALT中度上升，但胆道疾病、心血管、妊娠早期、ALT有不同程度上升。 AST主要用心肌梗死的酶学指标，特别是m-AST。 （二）血清碱性磷酸酶测定 1.测定方法简介 ALP对底物的专一性较差，常用的底物就有10多种。如β-甘油磷酸钠、磷酸苯二钠、磷酸对硝基酚、磷酸酚酞、α-萘酚磷酸盐、4-甲基伞形花内酯酰磷酸盐等。故ALP的测定方法有多种，根据酶促反应后测定产物的不同，可分为两类： （1）测定水解释放的无机磷 这类方法中有代表性的是鲍氏法。底物用β-甘油磷酸钠，缓冲液是二乙基巴比妥（pH9.3），在37℃反应1h，释放的无机磷酸盐与磷钼酸试剂反应生成钼蓝，测定600nm吸光度。此类方法灵敏度低、准确性较差，因产生的磷酸可重新与其他化合物结合，出现负偏差，同时又受血清中所含磷酸的干扰，操作麻烦，需去蛋白，保温时间长。 （2）测定底物水解后的羟基化合物 这类方法又可分为： ① 羟基化合物需与显色剂作用后比色测定 这类方法中有代表性的是金氏法。金氏法是20世纪80年代我国应用最广的方法，目前仍有部分基层医院使用。该法以磷酸苯二钠为底物，缓冲液是碳酸盐（pH10.0），在37℃反应15min，释放的酚与4-氨基安替比林反应，经高铁氰化钾氧化生成红色的醌类化合物。此类方法灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、保温时间短。 ② 羟基化合物在碱性条件下直接显色测定 此类方法中的底物是一个“自身指示”化合物，水解产物有较高的摩尔吸光系数。目前应用最广的是磷酸对硝基酚（4-NPP）法，该法既可手工操作，也能用于自动生化分析仪，方法简单而灵敏，比上述比色法优越，主要是因为它用了转移缓冲液2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）或二乙醇胺（DEA）作为磷酰基的受体，避免游离无机磷酸对ALP的抑制作用。是ALP测定的参考方法。 2.方法评价 布氏法，操作步骤多，时间长，但试剂易得。金氏法灵敏度高，反应速度快，时间短，操作简便，是临床测定中和操作的常规方法，皮一劳二氏法，时间长，线性范围有限，黄疸、溶血干扰大，现采用连续滥测法，加入AMP作为无机磷量体，避免了无机磷对ALP的抑制，扩大了线性范围，时间短，准确度高，是IFCC正式推荐的方法。 3.临床意义 ALP在体内分存广，正常血清中ALP主要来自骨髓中的成骨细胞，由肝脏经胆道排泄。因此，骨损伤畸形性骨炎，佝偻病、软骨病瘤、成骨肉瘤，胆道阻塞ALP↑。 （三）血清γ-谷氨酰基转移酶测定 1. 测定方法简介 γ-谷氨酰基转移酶（GGT）临床上常称为γ-谷氨酰转肽酶。GGT活力测定的方法主要有二大类： （1）重氮比色法 常以γ-谷氨酰α-萘胺为底物，双甘肽作为γ-谷氨酰基的受体，在GGT作用下，产生α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色化合物。此法操作简便，不需去蛋白，α-萘胺有一定的致癌作用。目前仅少数基层医院使用。 （2）连续监测法 GGT作用于无色的γ-谷氨酰-对硝基苯胺产生黄色的对硝基苯胺，在405nm处监测吸光度的变化，这是目前国内外测定GGT的主要方法。 2.方法评价 比色法操作简便，线性关系好，颜色稳定，精密度高，是基层实验室广泛采用的手工操作方法，但底物水溶性较差可先溶于1/50体积的无水乙醇中。连续监测法快速、灵敏、重复性好，同样有底