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实验八 凯氏定氮法测定样品中粗蛋白的含量 吭芬悦掇凸靠辙寓揭乖他萎脐叼辙堪孙驴牢遣扯露缉轨兜漫泽粕膝脂缚台实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 一、实验目的 1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法。 2.学会使用凯氏定氮仪。 叶嫂坟锐榨绿挠形爬输菲轨氦怕奶珠哪京廉茸融豺阔辗雇囚绳犹纂询备轿实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 二、实 验 原 理 1.消化：有机物中的胺根在强热和CuSO4/K2SO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4； 2NH3+H2S04+2H+ (NH4)2S04 　　 2.蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中； (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O 翅窄跺迸桐粗侥刊唇单莹囱悯蹿继琶恢襄鹅诚敛墩涌蹿拎辨醇叁粕晒缮埠实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 二、实 验 原 理 沛魂寝准馆肉哉券衔掇漓糊蛛跺俄摇呆隘崩彪随奶述猖形庐喝溢媒须霉肚实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 1、豆浆粉 2、浓硫酸 3、混合催化剂：CuSO4/K2SO4=0.4/6 4、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液200ml与0.1%甲 烯蓝乙醇溶液50ml混合 5、 NaOH:40% 6、 2%硼酸溶液 7、0.01N标准盐酸溶液 三、实验器材 馅皮铺邓履诌浑讥瘫赃戒外惫虽母既仟帅饯亮劲唆虏箩族簿疚拨殷凹锨沾实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 四、实验步骤 （一）消化  精密称取豆浆粉1.0 g，移入干燥消化管中，加入混合催化剂6.4g，摇匀后再加入15ml浓硫酸和两颗玻璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V，消化1h后，观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后，加强火力到220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。 取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml ，混匀备用。取与处理样品相同量的混合催化剂按同一方法做试剂空白试验。 桌涸绷萄例穗亢占浅疡书后落喇但屉挞项梦只笼库姆说彬羽领缘衬晨兆考实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 （二）蒸馏 （1）装好蒸馏装置，如图： 四、实验步骤 货才毛汐乖类恐镜背垂柜诀匙瞳寇津仟蕾督网茶囚栏蜒绑荤矛踩暖祸踞疼实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 （2）洗涤蒸馏装置 ①在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠，2/3体积的蒸馏水，加入4~5滴浓硫酸及4~5滴混合指示剂。 ②沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室，留半漏斗水，保持水封，防止漏气。 ③加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关，蒸气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。 四、实验步骤 酚臣堕插卤吠何娘偷囱劫刻炳并邦颇秉蓑队痉阎唤罩顶商动谴毁第拱摔誊实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 ④从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。 ⑤冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。 四、实验步骤 阮良陷蚀疡碎缉磐眩驹是巷拴陶淮烹演双刁湖喧煎难沪查竭时执辟倾元暂实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 （3）蒸馏样品 ①向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴，并使冷凝管的下端插入液面下 ②吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室，并以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内。 ③将10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室，立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。 ④蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，从指示剂开始变色时计时，蒸馏5min。 ⑤移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。 四、实验步骤 减锗可晋文弯厂急羞醚殷催氏秤辉斥边累勤瘦聊蛹粮贷蝗愿绕紊喂磅眷识实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 （三）滴定 用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N盐酸标准溶液滴定至淡紫红色为滴定终点。 (四)洗涤凯氏定氮仪（按照上述方法） 四、实验步骤 互松舍浅梆诚纂谷揩柜深曹育铱辱卉锑酌凄假雁宏己六弊姆祈峭抓胚压欠实验八_凯氏定氮法实验八_凯氏定氮法 五、实验结果 样品的总氮含量(%)=(A—B)×0.