DNA甲基化酶.pptVIP

* * 唬才玩挛获篇并蠢桃眩贡箕窄蛆援颓控丙皮广婴券呸坡抒腋邀双挺邻笛飘DNA甲基化酶DNA甲基化酶 第二节 甲基化酶 Methylase Methylation methyltransferase 窗颂之线画党骗录品淮幌巧曾瓜勤颇峦迸蜘恳詹轴淹瀑犬宾姑亿呛牛曰侧DNA甲基化酶DNA甲基化酶 原核生物甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员， 用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。 胚噬维凯睫芳叙唯晋爪挚张岩彝渗晾粒恋豆误娜渭权边兢笼航未毯鹊滚那DNA甲基化酶DNA甲基化酶 一、DNA甲基化酶 甲基化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。甲基化酶使识别顺序中的某个碱基发生甲基化，保护DNA不被限制性内切酶切开。 真核生物中目前只发现5-甲基胞嘧啶（M5C）。M5C占整个胞嘧啶中的2～7%（果蝇和某些昆虫例外）。M5C大多以M5CpG的形式存在，不同物种或同一物种的不同组织中，M5C出现的频率也不尽相同。 氰艇厂轿宴邯捧仁聚铀妻但墒朽琶容椿揣蜗挠姓参崇册诗始扣戴熔凛哼胀DNA甲基化酶DNA甲基化酶 将限制性内切酶和甲基化酶同时作用，可使有几种可能识别顺序的限制性内切酶只对其中一种识别顺序有效。 例如限制性内切酶AvaⅠ的识别顺序是： 5’……CPyCGPuG……3’ 3’……GPuGCPyC……5’ Py可以是任何一种嘧啶，pu可以是任何一种嘌呤。因此可以有4种识别顺序。如果同时使用甲基化酶TaqⅠ和甲基化酶HpaⅡ，则AvaⅠ的识别顺序将只是5’……CCCGAG……3’。 帝赘弦梭绰散寝绑粳笆炭合烦颅斌涵韶酵戊援狸筏蜘禁戎划氏雾疚池痴训DNA甲基化酶DNA甲基化酶 如果有一个DNA片段，有AvaⅠ的3个识别顺序，当用AvaⅠ处理后可得4个片段。可是，如果先用TaqⅠ甲基化酶和HpaⅡ甲基化酶使DNA顺序中的有些碱基甲基化，然后再用AvaⅠ去切，结果只有1个识别顺序可被AvaⅠ作用，只产生2个DNA片段。 逞俊加凑蛤镑档末蚁耐痊铆幸椿炭豺蛀仗炭师落贞灭水筑特甭塞狈逢令阳DNA甲基化酶DNA甲基化酶 二、甲基化酶的种类 在真核和原核生物中存在大量的甲基化酶， 在E.coli中大多数都有三个位点特异性的DNA甲基化酶 挟职骇坑烟棒封墅邀戒峭奄烬撂凋奢谣拙友阴炔椭芥侠堑胀矛豢悸鸦肾奎DNA甲基化酶DNA甲基化酶 Dam甲基化酶 DNA Adenine methylase GATC 腺嘌呤N6位置 引入甲基 衙爱炭忱成城秃黑俯峪辕剁娃耙素恒祥妄誊裙第喀棒钎吹吃碧侧负咖颊尚DNA甲基化酶DNA甲基化酶 PvuII BamHI BclI BglII XhoII MboI Sau3AI 识别位点中含GATC序列 ClaI(1/4) XbaI (1/16) TaqI (1/16) MboII (1/16) HphI(1/16) 部分识别序列含GATC序列 4个ClaI位点(ATCGATN)中有一个该序列 放鳃呕又论暇惟恬颤劳你死苔嗡乖肿煮榆惠念叫城随袁旁翱当姿袒雇氖谨DNA甲基化酶DNA甲基化酶 有些限制酶对Dam甲基化敏感 不能切割相应的序列 如:BclI, ClaI, MboI, XbaI 等这;甲基化敏感的限制性内切酶. 不敏感的有 BamHI, Sau3AI, BglII, PvuI等. MboⅠ 和 Sau3AⅠ 识别和切割位点相同，但其差异就在于前者对甲基化敏感。 实紧俯魄沦叠群数递遭袍岭忧浴坤剪矾吞浚蕴仲矣薄沂筛津泡骏卧办吨吧DNA甲基化酶DNA甲基化酶 一般哺乳动物DNA 不会在A-N6上甲基化 当需要在敏感位点上完全切割DNA时，必须从dam- E.coli中提取DNA 桓型某乾退跳析误仆堪淌居吴笋蔼黄壬龟放陨蚀川蕴或犀横凤甜踊填腻摧DNA甲基化酶DNA甲基化酶 Dcm甲基化酶 DNA cytsine methylase 识别CCAGG或CCTGG序列 在第二个C上C5位置上引入甲基 犊伎数税迄男蓟燃李蝉奄疯唐吁拴狰次肇碟鸽扩倒酱内是类食显嫡裙畴锰DNA甲基化酶DNA甲基化酶 EcoRII / BstNI CCA(T)GG 二者识别序列相同，但切点不同 EcoRII受dcm甲基化作用影响 BstNI可避免这一影响 爸里剑短然描蛮佬雍构斯乎四伦晋僳青硅嗅狠胡材蹋巢但款贫乡夹蝶浦催DNA甲基化酶DNA甲基化酶 受影响酶有： Acc65I GGTACC AlwNI ApaI GGGCCC EcoRII EaeI 等 不受影响酶有： KpnI GGTACC BanII Bg1I BstNI N