第二章天然产物提取方法和技术33.ppt

铅盐沉淀法 由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中，能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。 可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等 中性醋酸铅 碱式醋酸铅 范围更广 将中草药的水或醇提取液先加入醋酸铅浓溶液，静置后滤出沉淀，并将沉淀洗液并入滤液，于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉淀为止，这样就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。 铅盐沉淀具体方法 通以硫化氢气体，使铅变为黑色硫化铅而沉淀， 硫化氢脱铅比较彻底， 脱铅的方法 1 2 硫酸钠、磷酸钠等除铅，但硫酸铅、磷酸铅在水 中仍有一定的溶解度，除铅不彻底。 3 3 硫酸、磷酸调PH为3，但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度，除铅不彻底。还应注意脱铅后溶液酸度增加，有时需中和后再处理溶液， 用阳离子交换树脂脱铅快而彻底，但要注意 药液中某些有效成分也可能被交换上去，同 时脱铅树脂再生也较困难。 4 如：内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧酸盐而溶于水，酸化又析出。 橙皮甙、芦丁、黄芩甙、甘草皂甙均易溶于碱性 溶液，当加入酸后可使之沉淀析出。 酸碱溶液法 其他沉淀法 某些蛋白质溶液，可以变更溶液的值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。此外，还可以用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。 八、结晶 天然产物化学成分在常温下，多半是固体物质，都具有结晶化的通性； 可以根据溶解度的不同用结晶达到分离精制成为单体纯品。 五、结晶 纯化合物的结晶有一定的熔点和结晶学的特征，有利于鉴定。 求得结晶并制备成单体纯品，是鉴定天然产物成分、天然产物提取生产的重要步骤。 结晶是物质从液态或气态形成晶体的过程， 绝大多数物质的结晶是从液态通过一定条件形成晶态。 五、结晶 晶体具有一定的几何外形，离子、原子或分子在组成晶体时都形成有规则的排列； 生成结晶的过程叫结晶生长。 从比较不纯的结晶，再通过结晶作用精制得到较纯的结晶，这一过程叫再结晶。 1.结晶的方法 在工业上，结晶的方法原理上常分为两大类 第一类 除去一部分溶剂，如蒸发浓缩使溶液产生过饱和状态而析出结晶； 第二类 不除去溶剂，而用直接加入沉淀剂及降低温度等方法，使溶液达到饱和状态而析出。 第二类 不除去溶剂，而用直接加入沉淀剂及降低温度等方法，使溶液达到饱和状态而析出。 大致可分为： a.盐析法：用于大分子蛋白质、酶等； b.有机溶剂结晶法：小分子氨基酸等； c.等电点结晶法：多用于两性物质； d.其他：温差法，加入金属离子法等。 盐析法： a.加固体盐法(以细胞色素C为例） 加正丁醇 浓缩 树脂洗脱 细胞色素C 1.加入硫酸铵（0.43g/1g) 2.硫酸铵溶解 称量 1.加抗坏血酸（5mg/1g)， 36％氨水 冷至10℃ 加少量硫酸铵 至溶液微浑浊 塞好塞子 放置1-2d(15-25 ℃) 结晶 加硫酸铵（0.02g/ml) 结晶完全 盐析法： b.加饱和盐溶液(牛胰凝乳蛋白酶重结晶为例） 溶解在0.01mol/L硫酸中 5g粗结晶 加入饱和硫酸铵 5ml 加100g/L NaCl 5mL,5min加完 过滤 放置2d(室温) 结晶完全 结晶完全 放置1h(20℃) 溶菌酶 溶在0.04mol/L醋酸缓冲液 5mL,pH 4.7 溶于0.4mol/L硼砂中 pH 9 粗品 7d 过滤 滤液 加入结晶透析液 透析 透析 3-4d c.透析法(以羊胰蛋白酶为例） 结晶 结晶完全 盐析法： 有机溶剂法： a.丙氨酸结晶为例 低层析纯的丙氨酸溶液，减压浓缩至1/10体积， 趁热缓慢加入两倍体积热的95％乙醇， 结晶逐渐析出， 冷却放置过夜使结晶完全。 有机溶剂法： b.赤霉素的结晶 5g赤霉素粗品，加500mL乙酸乙酯加热回流0.5h， 大部分溶解后，脱色，过滤。 滤液慢慢加入1250mL石油醚， 即生成赤霉素结晶。 等电点结晶法： 乙酰－DL－色氨酸的重结晶为例 2.5Kg粗乙酰-DL-色氨基加1.2-1.3L，5mol/L氢氧化钠溶解， 40g活性炭脱色后过滤。 滤液在10以下用冰醋酸调pH至3,缓缓搅拌即析出大量结晶。 利用温差结晶法： 葡萄糖-1-磷酸钡盐的重结晶为例 葡萄糖-1-磷酸钡盐的粗结晶溶于20倍体积的0.05mol/L盐酸中，过滤除去不溶物。 清液在80后用1mol/L氢氧化钠调pH7.0，趁热过滤除去无机盐沉淀。 清液在4冰箱放置24h，得葡萄糖-1-磷酸