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实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁 一、目的要求 1. 掌握用校正曲线法进行荧光定量分析。 熟悉荧光分光光度计的使用方法。 二、实验原理 硫酸奎尼丁属生物碱类抗心律失常药，分子结构如图所示。由于其分子结构中具有喹啉环结构（奎尼丁为奎宁的右旋体），故能产生较强的荧光，可用直接荧光法测定其荧光强度，由校正曲线法或回归方程求出试样中奎尼丁的含量。 三、主要仪器与试剂 仪器 岛津RF-1501型荧光分光光度计，移液管（1ml，5ml5ml），量瓶（50ml） 试剂 H2SO4溶液（0.05mol/L），硫酸奎尼丁（原料药），硫酸奎尼丁对照品 四、操作步骤 1.硫酸奎尼丁标准储备液的制备 精密称取硫酸奎尼丁对照品约50mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取5ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得硫酸奎尼丁标准贮备液。 2.标准系列溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁标准贮备液1、2、3、4及5ml，分别置50ml量瓶中，用硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，制得对照品标准系列溶液。 3.试样溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁试样约10mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得待测样品溶液。 4.测定 （1）开机：先开主机电源，再开氙灯（Xe lamp）。 （2）确定最大激发波长和最大发射波长。 （3）校正曲线测定：将空白硫酸溶液放入吸收池，点击自动调零按钮“Autozero”，仪器自动进行空白校正（自动扣除空白）。输入浓度值，按顺序放入标准溶液，点击“Start”进行测定。标准系列溶液测定完毕后，绘制标准曲线，仪器窗口将显示标准曲线回归方程（FI=K*C+B）和相关系数(r)。 （5）试样测定：按弹出对话框的提示进行。试样测定的数据（荧光强度和浓度）将显示在数据表格里。根据浓度计算试样中硫酸奎尼丁的百分含量。 5.关机：先关氙灯，待仪器降至室温后，再关总机电源。 五、注意事项 1. 在溶液的配制过程中要注意容量仪器的规范操作和使用。 2. 测量顺序为低浓度到高浓度，以减少测量误差。 3. 进行校正曲线测定和试样测定时，应保证仪器参数设置一致。 六、思考题 1. 测定试样溶液、标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？ 2. 如何选择激发光波长（λex）和发射光波长（λem）？采用不同的λex或对λem测定结果有何影响？ 1. 答：消除硫酸溶液中荧光物质对于测定的影响。 2. 答：（1）① 固定发射波长，测定激发光谱；再固定激发波长，测定发射光谱通常选择在最大激发波长和最大发射波长进行物质测定