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黄曲霉毒素的检测方法研究 郝瑶 生工1班 20110801111 摘要：黄曲霉毒素为毒性极强的致癌物质，因其广泛分布于动物与植物等的食品中而成为食品安全检测的重要问题，对该毒素的检测技术特别是快速检测方法对保障农产品及食品消费安全具有特别重要意义。本文介绍了常用的三种黄曲霉毒素检测方法，即薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法。 关键词：黄曲霉毒素；食品安全；检测方法 1前言 黄曲霉毒素是一种剧毒和强致癌物质，是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物，可分为B1 、B2、G1、G2、M1、M2等。B1为黄曲霉毒素中毒性及致癌性最强的物质， 是间接致癌物，进入人体内经氧化代谢酶活化后形成的活性中间代谢产物与DNA大分子结合，导致细胞遗传特性改变，进而发挥其致癌致突变效应，又可被另一类代谢酶代谢解毒，使终致癌物结构发生改变而不能攻击DNA实现机体的自身保护作用。从物种上说，黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果，特别是花生和核桃中。黄曲霉毒素(aflatoxin， AFT)主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类有毒次生代谢物。在世界不同地区都发现了这些真菌大量存在于供人类食用的食品中，黄曲霉毒素污染已导致严重的食品安全问题[1，2]。自20世纪60年代以来，有关黄曲霉毒素的危害被大量报道，以致黄曲霉毒素已成为最受人们关注的一种真菌毒素[3]。因此，寻求准确、快速、简便的检测方法，对黄曲霉毒素进行高效的定性定量分析，是黄曲霉毒素研究的一个重要方面。 1993年，黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为一类致癌物，世界公认的三大强致癌物质之一，是一种剧毒物质[4]。 2 黄曲霉毒素研究概况 迄今为止，已经发现的黄曲霉毒素至少包含黄曲霉毒素B1 、B2、G1、G2、M1、M2等17种结构相似且特征已知的化合物，其结构特征为都含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮。黄曲霉毒素的理化性质比较稳定，如B1在高温200e、紫外线照射下，都不能使之破坏，加热到B1的熔点(268~269e)才开始分解;在酸性溶液中也很稳定，在pH1~3的强酸性溶液中则稍有分解[5]黄曲霉毒素的毒性为氰化钾的10倍，砒霜的68倍，能引起人急性中毒死亡，与人的肝癌有密切关系，能使家畜、家禽及多种实验动物诱发癌症，其中B1 、B2、G1、G2是最主要的毒素物质，而B1自然发生潜力最大的一种毒素[6]。 黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关，黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构，研究表明黄曲霉毒素的细胞毒作用可干扰信息RNA和DNA的合成，进而干扰细胞蛋白质的合成，导致动物全身性损害。 3 黄曲霉毒素的检测方法 黄曲霉毒素的检测方法从最初以薄层层析法为主，发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种方法普遍应用，其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分。这些新方法、新手段的快速应用，为黄曲霉毒素的检测提供了更广泛的选择余地，适应了不同的检测目的和要求。 3.1薄层层析法(TLC) 薄层层析法是测定黄曲霉毒素的经典方法，其原理是将样品经过提取、柱层析、洗脱、浓缩、薄层分离后，在波长365 nm紫外光下产生蓝紫色或黄绿色荧光，并根据其在薄层上显示的最低检出量来确定其含量。聂孝同等[7]应用薄层层析法采用以下步骤对饲料中的黄曲霉毒素进行了检测。首先是黄曲霉毒素的提取:把粉碎过20目筛的样品放入具塞三角瓶中，加入甲醇( 55B45 )溶液，再加入石油醚盖严，静置片刻后，用慢速定量滤纸过滤于分液漏斗中，通入三氯甲烷，再过滤并将滤液在65e水浴上通风挥干，冷却后加入苯-乙腈( 98B2 )充分混合，然后吸取上清液待用。对杂质少的样品，采取直板定性，依次点板、展开、观察;其中预展展开剂为无水乙醚，正展展开剂为丙酮-三氯甲烷(1B9)，且展开剂要事先加入到展开槽内;通过观察，无荧光出现为阴性，出现荧光则为阳性，需作直板确证，若继续有荧光出现，则进一步作定量确证;样品的某一点荧光强度与标样点的荧光强度相一致，则取此点为样本的黄曲霉毒素含量值，否则作稀释定量检测;但是对于杂质多的样品，须采取横板定性;同样经过点板、展开、观察，有荧光者为阳性检出，进一步作横向确证，经再次检测观察呈阳性，则需要定量确证黄曲霉毒素含量。为了提高薄层层析法的精度，建立薄层扫描法来测定黄曲霉毒素，它是薄层层析法的仪器化，样品的处理和层析条件与薄层层析法相同，只是在标准品的设定和结果判定上有所不同。杨焱等[8]把粉碎过筛的样品加水湿润后通入氯仿过滤，TLC法较适合于对黄曲霉毒素的定性检测，是研究黄曲霉毒素初期所使用的主要方法。 该检测方法所用设备简单、费用低廉、容易掌握，适用大量样品的分离、筛选，一般的实验室均可开展，属于定性和