吴怡慧-项目二超氧化物歧化酶(SOD)的生产讲解.pptVIP

模板来自于 / * 模板来自于 * 项目二超氧化物歧化酶（SOD）的生产 班级：生物制药1411 姓名：吴怡慧 预习方案汇报PPT 酶与SDO酶的基本知识 1 酶的生产工艺与准备 2 SOD酶的检验与准备 3 注意事项 4 Contents 目 录 第 一 章 节 di yi zhang jie 2、超氧化物歧化酶（SOD）基本知识 1、酶的基本知识 酶的基本知识 酶是由生物活细胞产生的具有特殊催化功能的一类生物活性物质，其化学本质是蛋白质，故也称酶蛋白。 用于预防，治疗和诊断疾病的一类酶制剂，称为药用酶。早期主要用于治疗消化道疾病、烧伤及感染引起的炎症等，现已广泛应用于多种疾病的治疗。 药用酶制备通常有三种方法：直接提取法；微生物发酵法；动植物细胞培养法 药用酶常用提取纯化方法有：水溶液法；有机溶剂法；表面活性剂法（应用较少） 超氧化物歧化酶（SOD）基本知识 概念：超氧物歧化酶（Superoxide Dismutase简称SOD）是一种新型酶制剂，是广泛存在于生体内各种组织的一种金属酶，是机体细胞抵御氧化损伤最重要的酶之一，是药用酶之一，被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。 功能：清除体内多余的自由基；延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象；提高人体抵抗自由基诱发疾病的能力；能抗疲劳、甚至抗肿瘤体内的SOD活性越高，寿命就越长。 分布： 主要分布 颜色 举例 真核细胞细胞质 蓝绿色 猪血、猪肝 原核及真核细胞线粒体 紫红色 人和狒狒肝细胞的胞液 原核细胞 黄褐色 绿菌属、脱硫弧菌属 主要来源：大蒜蒜瓣（含有丰富的SOD酶） 第 二 章 节 di er zhang jie 2、实训准备（材料与仪器) 3、酶的生产工艺流程图 1、SOD酶的提取原理 SOD酶的提取原理 有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。 实训准备（材料与仪器） 材料：大蒜蒜瓣 氯仿-乙醇混合液 冷丙酮 磷酸缓冲溶液 （PH7.8、 0.05mol/L) 仪器：一个石英砂研钵 离心管 移液管 玻璃棒 塞离心管 离心机 冷冻离心机 SOD酶的生产工艺流程图 称取5g大蒜 蒜瓣 捣碎 加入磷酸缓 冲溶液15ml (PH7.8 0.05mol/L) 再研磨20min 直到充分溶解 置于冷冻离心 机以6000r/min 离心15min 弃沉淀取 上清 提 取 于上清液中加入1/4 倍体积氯仿-乙醇 混合液 搅拌15min 以6000r/min离心 15min 弃沉淀取上清 得到粗酶液 加入等体积冷丙酮 持续搅拌15min以 6000r/min离心15 min 得到SOD酶沉淀 冷冻 干燥 将沉淀置于5ml磷 酸缓冲溶液中 （PH7.8、 0.05mol/ml） 以6000r/min离心15min 弃沉淀取上清液 用凝胶Sephacryl S-200进行纯化 进行超滤浓缩得到 SOD酶 除 杂 蛋 白 分 离 纯 化 第 三 章 节 di san zhang jie 2、实训准备（材料、仪器） 1、SOD酶检验的原理 3、SOD酶检验步骤 SOD酶检验原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-,生成带色的中间产物（反应液由黄棕色变为绿色，再变为黄色，这是由于生成的中间物不断氧化的结果）。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后就与时间呈现性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收，线性时间一般维持4min的范围内。在有SOD存在时能催化生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。 邻苯三酚自养化法测定酶活力，计算公式： 单位体积活力（u/ml）= 总活力（U）=单位体积活力x原液总体积 酶活力单位意义：在25℃