培养基配制与灭菌分解.ppt

1个标准大气压=1.05kg/ cm2=101.3kPa * 环境微生物学实验 微生物学的基本操作 无菌操作技术 分离纯化技术 染色观察技术 显微操作技术 实验一 培养基的配制与灭菌 一 目的要求 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 了解常用的灭菌方法和原理，掌握高压蒸汽灭菌技术。 二 简介 1、培养基的种类 根据物理状态（琼脂的添加） 固体培养基；半固体培养基；液体培养基 根据成分不同 天然培养基；合成培养基；半合成培养基 根据培养基的用途 基础培养基；营养培养基；鉴别培养基；选择培养基 2 、消毒(disinfection)与灭菌(Sterilization) 如：加热、过滤、 照射、使用化学药品 A 、 干热灭菌－利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的 火焰烧灼灭菌(Direct flaming)如接种环，接种针和金属用具 热空气灭菌(Hot-air sterilization)如玻璃器皿吸管，培养皿等用电烤箱在160-170oC（2小时）可以达到灭菌的目的 注意：培养基、橡胶制品、塑料制品不能干热灭菌 Autoclaving B 、 湿热灭菌：用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌 高压蒸汽灭菌法－压力为15 psi (Ib/in2 );121oC [ 250oF];15-30min? 用于培养基、工作服、橡皮物品、玻璃器皿等的灭菌 常压蒸汽灭菌法－如一些培养基（明胶，牛乳培养基） 煮沸消毒法－注射器、解剖器械等（10-15分钟） Filtration C 、过滤除菌－蔡氏过滤器、微孔滤膜过滤器 热破坏－血清、抗生素、酶等；孔径为0.22mm的微孔滤膜。  三 操作步骤 A 培养基配置 称量→溶化→调pH *→（过滤*）→分装*→加塞*→包扎→灭菌 B 高压蒸汽灭菌操作步骤 首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 开启电源加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1.05kg/ cm2 ，121℃，灭菌20分钟。 灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 四、本次实验内容 1、配高氏I号培养基：第1-16组完成配制 培养基配方：可溶性淀粉 20g, NaCl 0.5g，KNO3 1g，K2HPO4.3H2O 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g, FeSO4.7H20 0.01 g, 水1000 mL，pH7.4-7.6 固体培养基：琼脂15g/1000 mL 第1-8组：高氏1号液体培养基，合计配420 mL, 分装到试管5 mL/支，每组分装10支，共80支。 第9-16组：高氏1号固体培养基，合计配1800 mL，9-12每组分装3个三角瓶 60 mL/瓶，13-16组每组分装4个三角瓶，包扎好,共28瓶。 其它组同学提供3支试管+1个250mL三角瓶给上述组别同学，以待分装 每组最后需3支5 mL的试管，1瓶装60 mL固体培养基的三角瓶。 2、配牛肉膏蛋白胨培养基： 培养基配方：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g, 水1000 mL, pH7.4～7.6 第17-26组：合计配固体培养基2300 mL（含琼脂1.5％），17-24组分装30 mL/瓶 3瓶， 50 mL/瓶 3瓶，25-26组组分装30 mL/瓶 2瓶， 50 mL/瓶 2瓶。剩余的合并入大瓶。 其它组同学提供2个三角瓶给上述组别同学。 每组最后需要装30mL、50 mL培养基的三角瓶各一瓶。 1个标准大气压=1.05kg/ cm2=101.3kPa *