小鼠参考口服氯化钠的急性毒性实验.docVIP

小鼠口服氯化钠的急性毒性实验 丁 * * （***学院 *****专业 ******班 2*************） 摘要：研究氯化钠溶液对小鼠的急性毒性，学习动物实验的基本实验方法，掌握经口灌胃技术，学习半数致死剂量（LD50）的计算及毒性判定。选用SPF昆明小鼠，经口灌胃两次给药,统计死亡率，用改良寇氏法计算半数致死量(LD50)，并观察毒性作用。结果氯化钠对小鼠的口服LD50为8.48g/kg，95%可信区间为8.32g/kg～8.64g/kg。表明氯化钠属于低毒性的物品，在日常生活中可正常适量食用。 关键词：氯化钠；SPF昆明小鼠；口服；急性毒性；半数致死;LD50 作为烹饪调料的主要材料之一，氯化钠在生活中的用途无处不在，我们的生活已经和氯化钠紧紧联系在了一起。这就造成了人们普遍以为氯化钠是 “无毒”的。这其实是一个错误的认识，氯化钠其实并不是大家所认为的“无毒”。为了探究氯化钠急性毒性的级别，本实验采用SPF昆明小鼠作为实验对象，进行口服氯化钠的急性毒性实验，根据实验结果，采用改良寇氏法计算半数致死量，得出氯化钠的毒性等级。 1 材料与方法 1.1 实验动物 小鼠 SPF昆明小鼠37只，小鼠体重要保证组内差异20%（20～24g），雌雄各半，保证雌性未产、无孕。饲养前需要对小鼠的饲养房、笼具、饮水瓶等进行消毒。小鼠饲养在方形透明鼠笼中，保证充足的饮水和食物。实验前饲养2～3天，以适应实验环境，并观察其正常生长活动和健康状况。给药前禁食处理--空腹过夜（不禁水）。 1.2 药物 氯化钠。查阅相关资料文献后，我们得知氯化钠的LD0为200mg/kg，LD50为4000mg/kg，因此我们设定LD100为8000mg/kg，分为5个实验组，组距为：i＝(lg8000-lg200)/4=(3.9-2.3)/4=0.4，r=（n-1）√（LD100/LD0）=4√（8000/200）=2.51，因此得到各组剂量设计见表1： 表1 各组剂量分配结果 配制氯化钠溶液时，我们考虑到小鼠的灌胃容量约为0.4ml/只，需要配制的溶液浓度＝最高剂量/灌胃容量，实际需要溶液的量为：V＝最低体积＋耗量＝动物数×灌胃量＋耗量，由此可得各组的溶液配制情况见表2： 表2 各组溶液配置情况 1.3 方法 分组和标记 将小鼠按照随机分组的原则分成6组，每组雌雄各半，经过对染色法、耳缘孔口法烙印法挂牌法表示不同号码 1.3.2 灌服和观察 我们实验组Ⅴ组由于需灌胃量大，在小鼠胃的一次性容量之外，所以分两次灌胃，两次灌胃间隔半小时。灌胃前禁食8h，但不限制饮水。小鼠灌胃的方法：（1）左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其身体垂直，即使上消化道成一直线；（2）右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口角插入，避牙齿、舌头，贴咽后壁缓缓滑入食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深入胃部，一般进针深度2.5～3cm；（3）将盐水轻轻注入胃中。（4）如遇动物挣扎，应停止或将针拔出，千万不能强行插入，以免刺伤食管或内脏。 灌胃后及时观察小鼠的临床症状，是否有异常行为、异常生理变化。之后的7天每天都要观察小鼠的活动情况。 1.3.3 体重、采食和饮水 每天用电子称称取每只小鼠的体重、食料重量及饮水重量，记录小鼠每日体重、采食量及饮水量。记录数据见表3： 表3 实验组第Ⅴ组小鼠体重、饮水量及采食量数据记录表 记录 时间 小鼠体重（g） 饮水量（g） 采食量（g） 1 2 3 4 5 6 7 7日 晚 23 20 22.5 18.5 21.5 19 19 0 0 8日 晚 X 18 21 16.5 19.5 17.5 17 29 21 9日 早 X 20 19 17 21.5 17 17 16 7 9日 晚 X 20 X 16.5 20 18 17 10 6.5 10日 晚 X 21 X 16.5 21 19 X 17.5 17.5 11日 晚 X 23.5 X 18.5 22.5 21 X 24.5 19.5 12日 晚 X 24.5 X 21 23.5 22 X 24.5 16.5 13日 晚 X 26 X 21.5 24.5 24 X 27 16 14日 晚 X 28 X 23.5 26 25 X 30 14.5 2.3 LD50计算 LD50的计算公式为： 校正公式为： 标准误差为： LD50 的95%可信限 式中： i--组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 Xm—最大剂量对数 P—各剂量组死亡率(死亡率均用小数表示) Pm—最高死亡率 q—各剂量组存活率，q=1-p Pn—最低死亡率 ∑