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雌二醇 检测步骤 用ACCESS?免疫分析系统 定量检测血清雌二醇的浓度 内容表 原理 2 标本采集 2 试剂和仪器 3 定标 5 质量控制 5 检测步骤 5 检测结果 6 开始检测 6 检测注意事项 7 参考文献 8 Beckman Instruments, Inc. ? Chaska, MN 55318 原理 检测原理 Access 雌二醇的检测是一种使用了延时加入酶结合物的竞争结合的酶免疫检测。样品和包被了羊抗兔抗体：兔抗雌二醇捕捉抗体的磁性颗粒，以及含蛋白的Tris 缓冲液一起被加入到反应管中，20min以后，加入雌二醇-碱性磷酸酶结合物。样品中的雌二醇与雌二醇-碱性磷酸酶结合物竞争结合有限的特异性雌二醇抗体的结合位点，最后抗原-抗体复合物通过捕捉抗体结合到磁性颗粒表面。而后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530）, 该反应所产生的光子并被光电比色计所检测。光子的产量与样品中的雌二醇的浓度呈反比，最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品雌二醇的对应关系而计算出样品中的雌二醇浓度。 概述 雌二醇是一种分子量为272.3道尔顿的天然雌性激素。血循环中大多数的雌二醇与蛋白质结合，大约有1~3%的雌二醇以游离（未结合）形式存在与血清中。在非孕期的妇女中，雌二醇由卵巢和黄体分泌。肾上腺和睾丸（男性）也能分泌少量的雌二醇。月经期的雌二醇的水平最低，在卵泡期的早期开始上升，并在卵泡期的晚期先于hLH（人体黄体生成素）出现一个高峰，开始进入排卵期，hLH出现高峰时，雌二醇的水平在黄体期再次升高。雌二醇和孕激素刺激子宫内膜的增生，为受精卵的种植作准备。如果未受孕，黄体分泌的雌二醇和孕激素分泌减少，开始进入月经期。 雌二醇的水平对于监测卵巢的状态有用，因为雌二醇的水平能反映卵泡的成熟，雌二醇的测定对于评估性发育水平，闭经病因，不孕和停经的原因是一个有价值的工具。男性雌二醇的异常高水平则预示女性化综合征如男性乳房发育。 标本采集 血清是推荐的样品类型。 B. 遵循以下标本处理、运行和储存步骤(8，9)： 1、真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。 2、离心前使标本完全自然形成凝块。 3、全程保证样品管的密闭状态。 4、离心获得血清后的两小时内，至少将500 ?l血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。 5、储存样品，保持样品管完全密闭，在室温(15 到 30°C)条件下不超过8小时。 6、如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2 到 8°C冰箱冷藏。 7、如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20°C冰箱冻藏。 8、标本只能复融一次。 如果血清中的雌二醇浓度约为950pg/ml时，样品中至多含有10mg/dl (171 mol/l) 的胆红素，脂血样品中含甘油三脂1800mg/ml（20.32mmol/L）和溶血标本含有最多1 g/dl(10g/l)的血红蛋白外时不影响雌二醇浓度的测定。 试剂和必须品 Beckman Instruments, Inc. 4300 Harbor Blvd Fullerton，Ca 92834 A. R1: Access Estradiol 试剂盒： 2 盒装 货号：33540， 100 个测试，50测试/盒 现成可用； 在2到 10°C冰箱中顶端朝上存放； 试剂盒必须在2到 10°C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存； 2~10°C保存，试剂在有效期内稳定； 试剂盒被吸取使用后，在2 到10°C条件下可稳定14天； 出现橡胶层破坏或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。 所有抗血清均为多抗，除非有专门说明。 1. R1a: 含包被有羊抗兔IgG 的磁性颗粒，含兔抗雌二醇的Tris缓冲液，小牛血清白蛋白(BSA)， 0.1% 的叠氮钠。 2. R1b: Tris缓冲液，氯化钠，小牛或羊血清白蛋白(BSA)， 0.1% 的叠氮钠。 3. R1c: 雌二醇-碱性磷酸酶结合物，兔血清白蛋白(BSA) ， 0.1%的叠氮钠。 B. Access 雌二醇定标品 货号：33545， S0：4.0 ml/瓶；S1~S5：2.5ml/瓶； 定量检测的定标是用已知分析浓度的标本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线储存于仪器中，可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分析浓度。 现成可用，使用