(药敏试验.docxVIP

l药敏纸片的制作方法1.1纸片的制作及灭菌选用质量较好的滤纸片(定量滤纸)，用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每l00片放入一小瓶中，l60℃干热灭菌1-2小时或高压灭菌(15磅30分钟)后，在60℃条件下烘干备用。1.2抗菌药物浓度的配制1.2.1计算最小浓度值按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量(以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5克、l克、2克等)能配多少料或饮多少水，相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的毫升数。例如，药品使用说明上标明5克本品可拌50千克饲料，其换算方法为l克本品可拌10千克饲料，也就是1克本品拌l0000克饲料，相当于药品浓度为l克本品加l0000毫升蒸馏水。1.2.2浓度配制准确称取上述基本单位药量(片剂要研磨成粉末后再行称量)，在无菌条件下，按下列分列顶用蒸馏水进行倍比稀释。根据以上换算l克本品加10000毫升蒸馏水，即l克本品加1O×lO×10×lO毫升蒸馏水。如出现l克本品拌321克饲料等情况，可改成1克本品拌320克饲料，即加l0×4×8毫升蒸馏水。这样改动易形成分列项，并不影响实际效果，因为在配料时可按纸片浓度l克本品拌320克饲料进行拌料。如所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成。1.3 药敏纸片的浸泡及保存取0.5毫升或l毫升已配制好的药液注入已灭菌的含l00片纸片的小瓶中，置冰箱内浸泡1-2小时后取出烘干，并置冰箱中保存。3上述现场应用中提到的高敏药物和中敏药物，是指不同直径抑菌圈药物与治疗疾病实际效果相对而言的。根据笔者经验，抑菌圈直径在17毫米以上者为高敏药物，其治疗效果非常显著；抑菌圈直径在12-16毫米的药物为中敏药物，其对疾病的治疗效果较好；抑菌圈直径在11毫米以下者为低敏药物，该药对病的治疗效果很差。2：抗菌药物浓度的配制取复合制剂1g加水30毫升或0.1g加3ml水，直接浸泡药敏片。3：取出浸泡好的纸片烘干，并在冰箱中保存备用。药敏试验用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高，仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作，一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题，农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践，逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。 药敏实验作 用进行药物敏感度的测定简 称AST定 义体外测定药物抑菌或杀菌能力试验方 法纸片扩散法等操作方法药敏片法等目录1简介2分类 ? 纸片扩散法 ? 稀释法 ? 抗生素浓度梯度法 ? 自动化仪器法3实验步骤 ? 实验材料 ? 实验准备 ? 实验操作方法4结果观察5判定标准6影响因素 ? 培养基 ? 试纸片 ? 细菌 ? 培养时间7应用1简介编辑体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。2分类编辑纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的