毕赤酵母的培养基1..docVIP

毕赤酵母的培养 巴斯德毕赤酵母是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体。 比赤酵母表达常用的培养基： 1 LB培养基 胰蛋白胨 1% 酵母粉 0.5% 氯化钠 1% PH 7.0大肠杆菌培养 制作平板加入2%的琼脂粉，121摄氏度20分钟，可于室温保存。 用于培养 pPICZ αA 原核宿主菌 TOP10F’时可加入 Zeocin 25ug / mL（博来霉素，抗菌素） 宿主细胞His- 诱变造成的。 MD酵母转化筛选培养基（营养缺陷型His-）13.4g/L酵母基本氮源；0.4mg/L生物素；20g/L葡萄糖用于表达的毕赤酵母都属于组氨酸缺陷型的只有染色体上成功整合入重组质粒载体基因的毕赤酵母菌株才能在组氨酸缺失的MD培养基生长，以此筛选出重组子。 MM酵母转化进一步筛选培养基仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，成为基本培养基（minimal medium,MM），有时用符号“[ － ]”来表示。不同微生物的基本培养基是不相同的。 2 LLB 培养基 胰蛋白胨 1% 酵母粉 0.5% 氯化钠 0.5% PH 7.0制作平板时加入 2％琼脂粉。 121℃高压灭菌 20min。 可于室温保存数月。 用于培养 pPICZ αA 原核宿主菌 TOP10F’时，加入 Zeocin 25ug / ml，可以 4℃条件下保存 1～2 周. 3 YPD培养基 酵母粉1%，胰蛋白胨2%，葡萄糖2%，固体加2%的琼脂粉，YPD 培养基可常温保存,是毕赤酵母的最基本培养基，琼脂 YPD 平板在 4℃可保存 几个月。加入 Zeocin 100ug / ml，成为 YPDZ 培养基，可以 4℃条件下保存 1～2 周。 4 BMGY培养基?酵母粉1% 蛋白胨2%， 磷酸钾缓冲溶液平PH 6 100mmol/L YNB（酵母氮源）1.34% 生物素（4×10 -5 ）%甘油1%，毕赤酵母诱导表达前培养基，YNB和Biotin过滤除菌。培养24小时后，一 般静置过夜，待酵母沉淀后倒掉BMGY培养基，改换BMMY培养基，进入诱导表达阶段。 5 BMMY培养基 酵母粉1% 蛋白胨2%，磷酸钾缓冲溶液平PH 6 100mmol/L YNB 1.34% 生物素（4×10 -5 ）% 甘油1% 甲醇3%， 毕赤酵母诱导表达培养基，YNB和Biotin过滤除菌。摇瓶培养时每24小时 之后加入3%的甲醇诱导，一般诱导72小时。 6 YPDS + Zeocin 培养基 酵母粉1% 蛋白胨2% 葡萄糖2%，山梨醇1M, 琼脂2%，博来霉素100mg/ml 不管是液体 YPDS 培养基，还是 YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放 4℃条件下，有效?1-2周。 7 MGY培养基 34%YNB,1%甘油，4×10 -5 %生物素，将 800ml 灭菌水、100ml 的 10*YNB 母液、2ml 的 500*B 母液和 100ml 的 10*GY 母液混匀即可，4℃保存，保存期为 2 个月。 8 MGYH培养基 MGY培养基+0.004%的组氨酸 MGYH 在 1000ml 的 MGY 培养基中加入 10ml 的 100*H 母液混匀，4℃保存，保存期为 2 个月。 9 RD -5 Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基） （含有：1mol/L 的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10 %生物素；0.005%氨基酸） （1）. 将 186g 的山梨醇定容至 700ml，高压灭菌；（ 2）. 冷却后于 45℃水浴； （3）. 将 100ml 的 10*D、100ml 的 10*YNB；2ml 的 500*B；10ml 的 100*AA 等母液和 88ml 无菌 水混匀，预热至 45℃后，与步骤 2 的山梨醇溶液混合。4℃保存。 10 RDH Regeneration Dextrose Medium + Histidine （葡萄糖再生培养基 + 0.004%组氨酸） 在 RD 培养基配制的第三步中，在加入 10ml 的 100*H 母液，同时无菌水的体积减少至 78ml 即可，其余配制方法与 RD 相同。4℃保存。 11 RD 及 RDH 平板的制备 1. 将 186g 的山梨醇和 15~20g 琼脂粉定容至 700ml，高压灭菌；冷却后于 60℃水浴； 2. 参照 RD/RDH 液体培养基配制的步骤 4， 100ml 的 10*D、 将 100ml 的 10*YNB； 的 50