线粒体超活染色..docVIP

生命科学学院 Life Science College 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄 班级：2013级生科一班 学号：201300140062 同组者：曾玮璠 山东大学实验报告 2015年5月10日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：线粒体超活染色 一、目的和要求 1.?观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 2.?学习一些细胞器的超活染色技术 二、原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。?根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类，体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。? 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学“特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用；一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus?green?B)和中性红(neutral?red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 三、试剂和器材 一、器材? ?显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿，吸管、牙签、吸水纸。???? 二、试剂???????? 1、Ringer溶液? 2、1％、1／5?000詹纳斯绿B溶液? 四、实验步骤 ?1、用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。???2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1／5?000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20—30min）。???3、吸去染液，滴加Ringer溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。? ???4、在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有l一2个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。 五、实验结果