第六章-体外标记免疫分析预案.ppt

体外标记在核医学中的地位 体内诊断：脏器显像 功能测定 诊断 体外诊断：放射分析 临床核医学 治疗：131I治疗甲亢 核医学 实验核医学：利用核技术探索生命现象的本质和物 质变化规律 放射免疫分析（RIA）原理 放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复合物中放射性强度的改变，测定出未标记抗原量。 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。 １. 标准品 (1)化学结构: 应与待测物具有相同的化学结构 (2)化学纯度：高度纯化 (3)化学度量： 准确 (4)稳定性：不易变质、不易降解 ２. 特异性抗体 (1)亲和力大 (2)高滴度 (3)特异性强 (4)可长期保存 ３. 示踪剂（标记品） （1）高比活度 （2）生物活性与免疫活性与标记前一致 （3）化学纯度95% （4）稳定性好：标记品不易脱落 ４. 分离技术---要求 (1)结合部分与游离部分尽可能完全分开 (2)非特异性结合率（NSB%）低，小于5% (3)分离的成分便于测量 (4)分离效果不受外界环境影响 (5)分离试剂操作简便、价廉易得 微孔滤膜法 盐析法 活性炭吸附法 磁化颗粒法 双抗体法 固相分离法 分离方法 第三节 体外标记免疫分析的类型 体外标记免疫分析的类型 体外标记免疫分析 放射性核素标记 免疫分析 (RIA、 IRMA) 酶标记 免疫分析 发光标记 免疫分析 (化学发光标记免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析) 时间分辩荧光 免疫分析 放射性核素标记免疫分析 概念： 　　　一种将放射性核素测量的高灵敏性、高精确性和抗原抗体反应的高特异性相结合的体外测定超微量（10-9～10-15g）物质的新技术。 放射性核素标记免疫分析 分类: 竞争性(标记抗原,抗体限量) RIA 非竞争性(标记抗体,抗体过量) IRMA 放 射 性 核 素 标 记 放射性核素标记免疫分析 　 优缺点： 　　　自1959年Yalow和Berson创建的放射免疫分析（RIA）具有灵敏度高、特异性强、简便实用、成本低廉等优点。为生物医学的微量物质分析开创了新的领域。发展到目前为止由此衍生出了各种各样的标记免疫分析技术。 　　　虽然RIA仍有较广泛的使用市场和价值，但其方法学上固有的弱点使发展受到一定限制。如必须使用放射性同位素作为标记物，存在人为的因素影响较大、辐射防护及防止污染的问题，试剂盒使用时间短，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。 酶标记免疫分析（EIA） 概念： 　　　是应用酶标记抗体（抗原）与抗原（抗体）产生特异性反应，根据酶对底物的显色反应而定量分析待测抗原或抗体含量。 分类: 均相EIA：酶增强免疫分析（EMIT） 非均相EIA:酶联免疫吸附分析法（ELASA） 时间分辨荧光免疫分析(TrFIA) 概念： 　　　 是应用镧系元素标记抗原或抗体，利用紫外线或激光使其发射荧光，结合波长和时间两种分辨技术的微量分析方法。 常用镧系元素： 　　铕、铽、钐、镝 特点： 分析范围宽 灵敏度高 专一度高 稳定性强 1 2 3 4 发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 电化学发光免疫分析(ECLIA) 化学发光酶免疫分析(CLEIA) 分类 发光 Y Y Y 磁微粒 被测抗原 + 抗体 + 带吖啶酯标记物抗体 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 冲洗后 --- 夹心法 （1） 加入H2O2 （pH10） （2） 加入碱 （pH10） 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 概念： 　　　利用化学反应中释放大量自由能产生激发态中间体，当其退激到基态时，发射出光子，对这些光子量进行测量从而进行定量分析抗原含量。 常用发光剂： 　　鲁米诺类、吖啶酯类 特点： 灵敏度高 特异性强 重复性好 测定范围宽 1 2 3 4