(人参皂苷Re的分离提纯.docVIP

人参皂苷 一.人参皂苷的背景及药理作用 人参是一味被广泛用于养身治病的传统中药 ,与貂皮、鹿茸并称为中国东北三宝。而人参皂苷又是人参的主要有效成分 ,其药理作用表现多样。人参皂苷虽然在人参的药理作用上起了关键性的作用，但其含量很少,只约占4 %。根据皂苷元的不同 ,人参皂苷被分为原人参二醇类皂苷、原人参三醇类皂苷及齐墩果酸类皂苷。现在我们对于单个人参皂苷的药理作用研究已非常深入 , 像其在神经系统、小肠传送功能、内分泌系统、免疫系统、信号传导、抗衰老、溶血、烧伤创面愈合、抗肿瘤增效、人的精子活力、药物代谢酶、降血糖方面的影响机理都有相关的新研究成果，人参皂苷 Re也已被证实具有抑制中枢神经，促进 DNA、RNA合成，促进血清蛋白质合成，促进蛋白质分解酵素活性化，促进刺激副肾皮质荷尔蒙 分泌等作用。 人参皂苷作为人参的主要有效成分之一,其药效作用表现的多样性在一定程度上揭开了人参具有奇特功效的神秘面纱。作为皂苷类成分 ,其口服直接经肠道吸收是比较差的 ,大多需要经肠道菌群代谢后 ,其代谢产物才能被较好地吸收入体内。从这一点来讲 ,人参皂苷的药效作用与肠菌代谢的关系是密不可分的 ,因此 ,今后需进一步加强人参皂苷肠菌代谢这一关键上游环节的研究 ,这对于进一步认识人参皂苷起效的物质基础及体内过程是相当重要的 ,而且有利于判断体外实验结果的价值。但是 ,对于人参皂苷在成分及剂量上的配伍研究还显得较为薄弱 ,这需要在今后的研究中予以加强。再者 ,人参皂苷具有典型的双向调节作用 ,如何通过控制相关条件及合理的配伍来达到治疗目的也是今后值得研究的一个方面。 二．人参皂苷的分离提取 人参皂苷在人参中的含量很低，在人参的各个组织器官中的含量都有所不同，这无形中又增加了我们对人参皂苷的分离提取的难度。在实际生产中，我们一方面要保证皂苷的产率，另一方面又要保证它的生物活性。下面我就以人参皂苷 Re的提取为例，通过硅胶柱层析技术 从人参叶三醇皂苷中分离制备 较纯人参皂苷Re，采用重结晶技术将分离后较纯 Re精制并通过 HPLC检测其纯度： （一）材料 人参皂苷标准品Re、Rg ，精致人参叶三醇皂 苷，薄层层析板Silica Gel 6O—F254，AB-8大孔吸 附树脂，硅胶G。 （二）方 法 1.硅胶柱层析法 制备样品胶：将叶三醇皂苷用甲醇溶解，加入 8O～100目硅胶，水浴蒸干，不断搅拌，直至硅胶 复为粉末状。 装柱：取3OO～400目硅胶作分离胶，用漏斗 装入玻璃柱内铺放均匀，其上装入样品胶，最上层 置脱脂棉，洗脱液洗脱。通人氯仿直至色素至分 离胶底部，按照V(氯仿)：V(甲醇)一8．0：2．0 进行洗脱，TLC检测分离结果。用旋转蒸发仪浓 缩得固体产物。薄层层析法 人参皂苷溶于甲醇中，微量点样器吸取标准 品及样品，点样于薄层层析板起始线上，电吹风吹 干。将点好样品的薄层板放入层析缸的展开剂中 展开，1O 硫酸溶液显色。将样品点与标准品点 对照以确定样品中所含皂苷成分。所用展开剂： V(氯仿)： (甲醇)：V(水)一7．0：2．5：0．5。 2.HPLC方法测定人参皂苷单体的纯度 实验所用色谱仪为美国Waters2695高效液 相色谱仪，配2996二极管阵列检测器(PAD)及 Empower2色谱工作站；Cl8色谱柱为 Thermo— Hypersil ODS2 250 mm×4．5 ITlm，5 m；进样量 为1O L。流动相 A为乙腈，流动相B为水。取 样品及标准品各 2 mg，分别溶于 1 mL甲醇中。 流动相的比例为：初始，A为 2O ，B为 80 ； 20 min Et~，A为 2O ，B为 8O ；31 min时，A为32％，B为68％；4O min时，A为43％，B为 57％； 7O～8O min时，A为 100 ，B为 0。 （三）结果与讨论 采用硅胶柱层析法对人参叶三醇皂苷进行分离，TLC点板后收集单点Re产品，通过结晶法精 制，从而得到较纯的人参皂苷 Re。 1.硅胶柱分离人参皂苷Re 称取叶三醇皂苷 35 g，用硅胶柱层析法分离， TLC检测。有实验证明，在相同的条件下有各个成分被洗脱出来有时间先后的区别，，一般Re比Rg晚洗脱出来，因此，我们可以控制洗脱时间，选取恰当的单点，来获得较纯的单品。其他分离产品的结果可知，叶三醇中主要含有人参皂苷 Re、Rg 等，经硅 胶主分离可得到较纯的Re、Rg 的单体，其中Re 为单点，纯度很高，得率为21．O3 。 2.人参皂苷单体的提纯及检测 2.1人参皂苷单体的精制 经硅胶柱分离的人参皂苷Re，仍然含有少量 的人参皂苷Rg 杂质，需要对分离后的人参皂苷 Re进一步提纯，采用结晶法精制。 称取分离后纯度较高的人参皂苷Re 5 g，加 入甲醇溶液 1