中文版 分生第七课..pptVIP

分析工具 常常使用的理化分析方法: 超速离心法 用来评估材料。大小 电泳 用来测试高电荷质量比 紫外吸收分光光度法测定 此外光的吸收量和DNA成正相关 基础化学分析 氮磷比率为1.67 凝胶电泳 这项技术可以确定dna 凝胶电泳的步骤 1. 用限制性内切酶切割dna. 2. 使dna片段通过凝胶. 3. 在凝胶中片段会形成dna带 4. DNA带是独一无二的,可以用来确定一个物种. 5. DNA带像“遗传指纹”. DNA: 遗传物质 在1944年 一组测试确定了传代物质的化学本质 应用的技术已经排除了蛋白质和rna作为遗传物质的可能性 确定dna就是遗传物质 赫尔希-蔡斯转型实验的过程 DNA 结构 罗莎琳富兰克林的x射线数据表明有一个螺旋DNA的形状; 数据还表明是一个常规，重复的结构 DNA序列被认为不规则的 沃森和克里克提出了磷酸多糖骨架在外面,碱基对在内的双螺旋结构模型 DNA螺旋 结构类似于一个螺旋楼梯 梯子两侧的把手代表着磷酸多糖 楼梯的台阶像碱基对 每十个碱基对环形上升一周 箭头所示是反向平行的双联 DNA的组成 生化学家在20世纪40年代确定了核苷酸的组城 DNA的组成包括 含氮碱基: 腺嘌呤 (A) 胞嘧啶(C) 鸟嘌呤 (G) 胸腺嘧啶 (T) 磷酸 脱氧核糖 DNA的组成 Dna是磷酸核糖在外，碱基对在内的双螺旋分子 碱基对按照一定的法则配对: A结合T G结合C RNA 组成成分 含氮碱基 和dna一样，只是尿嘧啶取代了胸腺嘧啶 磷酸 核糖 核苷酸 DNA 和 RNA 的组成亚单位是核苷酸，它们连接在一起，形成核酸链 核苷酸包含一个和磷酸核糖1位相连的基团 Dna和rna中的磷酸和核糖通过磷酸二酯键相连接 DNA 连接 核苷酸 是由 核苷和一个磷酸基团通过磷酸二酯键相连接组成的 核苷酸可能含有一个两个甚至三个磷酸基团 核苷三磷酸 例如 三磷酸核苷有极性 分子的顶端含有一个5‘磷酸基即5’端 底部含有一个3‘羟基即3’端 核酸的物理化学性质 DNA和RNA分子能在几个不同的结构变体中出现 相对湿度的变化会引起DNA分子结构的变化 Dna螺旋在生理情况下是右手螺旋，但是在1979年人们发现了左手螺旋形的dna分子 各种DNA的结构 高湿度下的dna是B型 DNA 在比细胞内的湿度下降75%左右的环境中dna表现为A型 Dna的生物特异性 G和C,A和T的比值在任何特定的有机体是固定的 G + C占总百分比的变化从22到73%不等 这样的差别在物理性质上也得到体现 DNA 变性 在热的作用下，dna连保持完整的共价键力量变得削弱和不稳定 维持稳定的力量破坏时，两条连发生变性或融化 当有一半的DN连接断开时的温度成为解链温度或Tm GC 在dna中的含量对解链温度有影响，含量越高解链温度越高 DNA 变性 除了温度下列方法也可使dna变性: 有机溶剂 高 pH 低渗溶液 GC 含量也会影响 DNA 密度 直接的，线性相关 这是由于一个A-T碱基的摩尔体积比碱基的G-C摩尔体积要大 DNA 复性 Dna双链解离后在合适的环境中会重新结合在一起，这个过程称为热处理或者是复性n 三个重要的因素: 温度 – 最好低25度于 Tm DNA 浓度 – 在一定范围内应使浓度较高以便于两条链能识别对方 复兴时间 – 时间越久，越容易发生 多核苷酸连杂交 杂交就是两种不同的核酸结合在一起 双联应当包括 1条 DNA 和1 条RNA 也可以是两条互补的或者是大部分互补的dna链 DNA 大小 Dna大小有三种衡量方法: 碱基对的数目 分子量----一个碱基对约是660 长度 – 每10.4个碱基对组成一个螺旋，长度约是33.2 ? 埃 可以用电子显微镜或者是凝胶电泳来测量分子量的大小 DNAs各种大小和形状 噬菌体DNA是典型的例子 有的dna是线状的 超螺旋的 DNA 像扭曲的橡皮筋 自然状态下的DNA尺寸范围从几千个碱基到成千上万的序列变化不等 小分子量的到哪能通过电子显微镜估算 这项技术当然也能分辨出dna的形状是环形的，线性的，还是超螺旋的 Dna大小与基因组容量大小的关系 如何知道在dna分子的特定片段中有过少个基因? 不能单从dna的大小来决定 相关因素: Dna和基因的关系? 基因之间的关联? Dna大小与基因组容量大小的关系 在dna分子中有过少个基因? ? 假设如下 基因翻译成蛋白质 蛋白质大约有 40,000 D 有多少氨基酸这是否代表什么? 平均一个氨基酸的质量大约是110 D 平均蛋白质- 40000/110 = 364氨基酸 各氨基酸= 3 DNA碱基对 364个氨基酸需要1092碱基对 DNA 基因组容量 平均DNA会有多大? 大肠杆