【2017年整理】USP微生物限度检查 中文.docVIP

USP微生物限度检查 中文 61）微生物限度检测 （MICROBIAL LIMIT TESTS） 此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。在样品检测过程中须进行无菌操作。若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。 准备实验 (Preparatory Testing) 本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌 （Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。方法如下： 将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序： （1） 增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者 （2） 中和一定数量的干扰因子；或者 （3） 结合（1）、（2）得出适当条件， 使接种物得以生长。 以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用： 大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。然后重复前面的实验，用液体酪蛋白消化物-大豆卵磷脂-聚山梨醇酯20（Fluid Casein Digest-Soy lecithin-Polysorbate 20 Medium）论证待测样品里的防腐剂或其他抑菌因子被中和。若产品中含有抑菌物质且产品是可溶性的，则采用“无菌实验（Sterility Tests 71）”里的“薄膜过滤法 (Membrane Filtration Method)”进行(微生物限度)检测会更适宜（suitable）。 在抑菌物质得以适当中和、稀释液体积大幅度增加后仍不能排除抑制因子，以及不适宜用“薄膜过滤法”的情况下，可能会因为产品本身的杀菌作用导致细菌无法生长。当产品不能检测出接种菌种的情况下，应用光谱法确定产品的抑菌/杀菌成分。 缓冲液和培养基 (Buffer Solution and Media) 按照下列配方配制培养基，或者使用规范厂商生产的培养基干粉进行培养基配制，所使用的干粉培养基应该与在此列出的培养基成分比例相似。 在按列出的配方进行培养基配制时，用水溶解固体物质，必要时可以加热以得到完全溶解的均匀溶液。在使用前用盐酸或氢氧化钠将培养基的pH值调节到要求范围，调节pH值应在25±2O条件下进行。 若培养基配方有琼脂，应使用湿度不超过15%的琼脂。溶解水为纯化水（Purified Water）。 PH 7.2 磷酸(盐)缓冲液 储备液——称34g磷酸二氢钾于1000mL容量瓶，加水500mL溶解。用氢氧化钠TS调节pH 至7.2±0.1（约175mL），然后加水至容量瓶刻度，混匀。分装溶液后灭菌。冰箱保存。 培养基 除另有指出，培养基应在高压灭菌器中加热灭菌。（见1211“灭菌”章节中的“蒸汽灭菌”）。保存时间（exposure time）取决于培养基的灭菌体积。 1、 液体酪蛋白消化物-大豆卵磷脂-聚山梨醇酯20培养基 酪蛋白胰酶消化物20g 大豆卵磷脂5g 聚山梨醇酯2040mL 水960mL 将胰腺酪蛋白消化物和大豆卵磷脂溶解于960mL水中，48~50℃水浴加热约30分钟得均匀溶液。加40mL聚山梨醇酯20，混匀，按需要分装。 2、 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 酪蛋白胰酶消化物15.0g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物5.0g (Papaic Digest of Soybean Meal) 氯化钠5.0g 琼脂15.0g 水1000mL 灭菌后pH值：7.3±0.2 3、 液体大豆酪蛋白消化物培养基 按照71无菌试验里的方法进行配制。 Soybean Casein Digest Medium under Sterility Tests71. 酪蛋白胰酶消化物17.0g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物