(LTP试验方法1.docVIP

海马长时程（LTP）增强检测 1.同心圆双极刺激电极与单极记录电极的制备（玻璃微电机的制备） （1）同心圆双极刺激电极，①钨丝的，不锈钢的或者铂金的都行。自己制作方法：取4号或5号针头一枚,挫刀挫去底部，只留乳头及针尖。针尖斜面剪去，打磨，通条畅通针道乳头部焊接一不锈钢条（普通回形针拉直即可）从乳头部滴入绝缘漆，使针管内道涂满绝缘漆取适当粗细合金丝穿过针道，乳头外部分可饶成弹簧状，防止合金丝容易被拉出尖镊子缠些棉花，蘸绝缘柒均匀涂布回形针焊接端，乳头，针尖外表面，漆不宜过多，勿使成窜珠状放入烤箱中烤2小时，取出再涂一遍绝缘漆，再烤使用时将露在针尖外的合金丝剪去，只留约0.5mm合金丝尖和未涂布绝缘漆的回形针端分别为电极的两极。②注射针头打磨如上，用漆包线绞合，穿入针管，露出1-2mm。针栓滴入502，用2次，减去少许铜丝即可。③找一根注射针头，截去尖端，磨平。高强度漆包线绞合，穿入针管，头端露出1.5mm左右，在针栓部滴入502，至针尖流出少许。干后用利剪剪去少许露出的漆包线，使尖端光亮即可。如尖端氧化严重，再剪去少许。 （2）单极记录电极：王水的配置→微电极毛坯管清洁→拉制→电阻检测→灌注KCl溶液 漂浮电极用直径约为2—3mm 的银丝制备。取长约8cm 的银丝，绕成直径约为5mm 的弹簧圈，圈数约为3—5。弹簧上端焊接的银丝直径1mm、长约3cm 的以便夹持于微电操纵器上。弹簧下端焊接银丝直径约1cm、长约3cm 的银丝，以便插入微电极内。 2.在三维脑立体定位仪上将麻醉大鼠固定，颅骨钻孔备用 （1）水迷宫实验结束后，以25%乌拉坦将实验大鼠进行腹腔麻醉 (l.5g/kg)，动物体温(肛温)维持于37～38℃之间，随时注意动物状态。 （2）大鼠头部固定：将大鼠的门齿固定于三维立体脑定位仪上颌固定器，然后把一侧的耳捧推入动物的外道后，使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道，参考（图-1）这时观察两个耳棒的刻度一致后，将两耳棒上的固定螺丝扭紧，在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧（鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好），这时从各个方向推压动物头部，均不会出现移动。 （3）开颅钻孔前的备皮：剪去动物头部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口，分离皮下组织，用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离，推开骨膜，暴露前囟、人字缝及矢状缝。参考（图-2）开颅勿伤及脑膜,尽量避免出血。 （4）确定标准中线：将金属定位针向下移动到矢状缝上方后，再前后移动定位针，使定位针定位到前囟。 （5）大鼠海马定位钻孔：按照坐标(刺激电极为S:Bregma后4.2mm，中线右侧旁开3.8mm，记录电极为R:Bregma后3.4mm，中线右侧旁开2.5mm)，参考（图-3） 图-1 图-2 图-3 将自制绑定于聚乙烯管内的同心圆双极刺激电极和单极记录电极缓慢同步垂直插入海马内刺激和记录部位，即schaffer侧支和CAI区放射层[63]，接近预定部位时，缓慢、精细调节刺激电极和记录电极的下插深度，同时每10～20s给予一个波宽为50ms，强度为2.5～5mv的正电压刺激。测试刺激频率为0.033Hz，直至出现最佳的场兴奋性突触后电位 (fleld exciatatory postsyna PticPotential，fEPSP)，然后将电极位置固定，在最佳fEPSP处以引起最大反应30-40%的刺激强度作为记录基础fEPSP的刺激强度，记录持续30min以确保基础性突触传递的稳定性。诱发LTP的高频刺激 (high frequency stimulation，HFS)为200HZ，每串刺激包含20个脉冲，共3个串刺激，串间隔为30s[64]。HFS诱发出LTP后连续记录60min以观察LTP反应的长时程特点。记录信号经美国MP150型16导多道电生理信号采集处理系统进行采集、放大，并在多媒体计算机中显示和储存，通过Sigmaplot软件将实验数据及图像输出处理。 This is a fixed brain, all of the cerebral cortex has been removed exposing the whole hippocampus and the fornix. This is the dorsal view,and it will be easier to understand the sections modified This picture is very interesting. The hippocampus has been folded forward, clearly exposing the fornix colum. By following t