流动相使用剖析.ppt

液相色谱保养与维修培训班 二. 输液泵、检测器、手动进样 器故障与维修 一. 液相色谱日常使用 注意事项 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 1. 流动相的选择和注意事项 水的纯度：去离子水，最好用二次重蒸水。 乙腈的特性：低波长吸收小，极性较甲醇大有一定的粘黏度（易使单向阀粘黏），对PEEK及Tefl管有侵蚀性。 使用二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿溶剂时，对PEEK管和头有侵蚀作用，因此请勿将两者在一起使用。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 无在线脱气应注意： 1）每天脱气 2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长 3. 溶 剂 前 处 理 过滤：用0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱、在线过滤板及进样器. *HPLC级的试剂有些也应过膜。水也应过膜。尤其是缓冲液必须过膜。 *注意滤膜的质量。 4. 更换流动相时的注意事项 更换互溶流动相时注意清洗吸滤头 更换不互溶流动相时必须用中间过渡液清洗系统，例如异丙醇 更换缓冲液时，应用纯水过渡。 更换流动相后应使用PURGE键快速排液。排去残液或气泡。 5. 使用缓冲液注意事项 注意缓冲液的pH值与使用的色谱柱匹配 缓冲液必须过滤膜。 使用缓冲液期间，用注射器推纯水，清洗柱塞杆，延长泵密封垫寿命。 分析完后用纯水清洗系统。 6. 自动进样器清洗液 如选择不当重现性不好 常用1：1的甲醇水或不含盐的流动相 清洗液必须过滤，经常更换。 清洗液需对样品有一定的溶解度。 不可用乙腈作为自动进样器的清洗液。 6. 开机后检查 送液泵：进液管是否有气泡，压力显示？是否波动太大（0.3-0.5 MPa之内)，有无漏液。 柱温箱：温度设定，Oven 键开启，是否升温 检测器：开机后自检正常，出现初始画面，确认分析波长。 基线检查：噪声、波动和漂移 7. 关机时注意事项 保存数据，退出工作站 清洗柱子及系统 保留在柱子和系统中的液体（甲醇或异丙醇），水能够发霉及长菌，乙腈长期保存对吸液管和PEEK头有危害。 HPLC Business Dept Shimadzu Corporation LC-10A系列 一. 液相色谱日常使用注意事项 1. 流动相的选择和注意事项 流动相的选择 2. 溶 剂 等 级 水的等级 纯化水 蒸馏水 去离子水 波长 (nm) 纯化水 去离子水 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高 纯化水中去除了无机和有机的污染物 吸光率 水 / MeOH梯度 ODS 柱 鬼峰 Gradient Curve 1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins. 2. 溶 剂 等 级 鬼峰的出现 2. 溶 剂 等 级 溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯 工业纯 都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质 微量分析、梯度洗脱 甲醇 乙睛 正己烷 分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图 2. 溶 剂 等 级 General Maintenance and Troubleshooting 缓冲液的使用 使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞: 用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min 易受到细菌和霉菌的影响 2. 溶 剂 等 级 不能直接用有机溶剂冲洗 3. 溶 剂 前 处 理 返回 纯度：HPLC级 = 优级纯＞分析纯 都经过蒸馏和0.45u的过滤（除纤维毛，未溶解的机械颗粒） 有防腐剂、抗氧化剂 经过0.2u过滤 无紫外吸收 尽量使用极性较低的溶剂。能使用甲醇就尽可能用甲醇。 （2）作糖的、酸的阴阳离子交换柱不能用有机溶剂冲 （3）选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，可提高测定的灵敏度 （4）使用低粘度的溶剂，可减少溶质的传质阻力，有利于提高柱效。（5）如使用紫外检测器，不能选用有