5.2多聚酶链式反应扩增DNA详解.ppt

五、结果分析与评价 1、原理：DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰(图5-11)。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定。 注意事项：详见操作提示 五、结果分析与评价 DNA 含量的测定：稀释→对照调零→ 测定→计算（公式见P63） 波长260nm处读数 蒸馏水做对照 50倍 实验结果与分析 DNA含量(ug/mI)=50 ×（260nm的读数）× 稀释倍数 六、课题延伸 1、PCR优点： 2、PCR技术的应用P58 原理虽然复杂，但操作却十分简单。快速、高效、灵活和易于操作 PCR技术与体内DNA复制的区别： 1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要； 2. PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而其他生物体内的聚合酶在高温时会变性； 3. PCR一般要经历三十多次循环，而生物体内DNA复制需要生物体自身的复制。 练习 (课堂检测) 1、DNA单链的________末端为3′端, ________末端为5′端,在DNA复制时,引物从模板链的___端配对结合.在___________酶的作用下,从引物的____端,使子链向下延伸. 2每次循环可以分为______________________这三个过程,对应温度分别为__________________. 磷酸基团 羟基 羟基 DNA聚合 3/ 变性、复性、延伸 95℃、55 ℃ 、72 ℃ 90℃以上、50℃左右 、72 ℃左右 练习 (教材P63) 1、一个DNA片段经过30次循环后能形成________个这样的片段. 2、依据DNA吸收紫外光的情况,用紫外分光光度计测得 DNA=_____________________________ 230 50 x(260nm的读数)x稀释倍数 练习巩固 1、关于PCR技术的应用，错误的一项是 A 古生物学、刑侦破案、DNA序列测定 B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学 C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘ D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定 2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？ 3、PCR技术最突出的优点是 A 原理简单 B 原料易找 C TaqDNA聚合酶有耐热性 D 快速、高效、灵活、易于操作 子链的5′端向 3′端延伸 4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是 A 反复洗涤 B 不怕外源DNA污染 C 高压灭菌 D 在-20 ℃储存 移液器 返回 离心管 返回 离心机 返回 PCR仪 返回 * * * * * * * DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断 课题2 1、多聚酶链式反应的概念 一 、课题背景 2、多聚酶链式反应的应用： 的诊断、 、 、 和DNA 等各方面。 遗传疾病 刑侦破案 古生物学 基因克隆 序列测定 1、DNA分子的组成成分和结构 DNA 分子的基本组成单位是 .共有 种,每个基本单位是由一分子的 、一分子的 、和一分子的 构成。 脱氧核甘酸 4 磷酸 碱基 脱氧核糖 那么DNA分子的平面结构怎样呢？ 二 、基础知识 2、DNA分子复制的过程 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的 3′ 端开始连接脱氧核苷酸 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（ RNA） 打开DNA双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸 思考：3、体内DNA复制的条件是什么？ 体外扩增DNA 如何提供相似环境？ 变性（ 80-100℃ ） Taq聚合酶（耐高温） 20—30个核苷酸构成DNA或RNA DNA双链 单链 变性（加热80-100℃ ） 复性（缓慢冷却） 4、DNA 分子的热变性原理： 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 （一） 、PCR技术的原理 利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。 体外DNA复制的条件： 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。 复制的方向：子链的5′端向 3′端延伸。 （一）、PCR技术原理 PCR 参与的组分 在DNA复制中的作用 高温变性 解旋酶 打开DNA双链