10,11第十章紫外分光光度法.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (二) 数学变换法（自学） 1、导数光谱法 零阶 一阶 二阶 三阶 四阶 导数光谱的定量方法 p.峰谷法 d.正切法 z.峰-零法 导数光谱法检定乙醇中痕量苯 空白醇(1)，醇中含苯0.0001%(2)与0.001%(3)的吸收光谱含苯0.0001%醇液的二阶(4)与四阶(5)导数光谱 2、褶合光谱法(Convolution Spectrometry) I 通过数学变换，把被掩盖的信息提取出来、构造 新的独立光谱体系； II 以新的光谱体系为基础建立定性定量方法； III 改造现有的分光光度计，向分光光度计智能化、自动化及多功能化发展。 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 Convolution trasformation Original spectrum Convolution spectra ?褶合光谱与吸收光谱一样 具有定性定量特征 吸收光谱：A = ECl  褶合光谱：Q = QijCl 紫外可见分光光度法在结构分析中的应用 单独用UV-Vis光谱不能完全确定物质的分子结构 （一）从吸收光谱中初步推断官能团 （二）异构体的确定 1.结构异构体 2.顺反异构体 （三）化合物骨架的确定 有机化学物紫外吸收光谱 溶剂极性改变？ K 从吸收光谱中初步推断官能团 化合物骨架的确定 什么是比色法？ 对于能吸收可见光的有色溶液的测定方法。 许多不吸收可见光的无色物质可以用显色反应变成有色物质，使之能用比色法测定。 也称为可见分光光度法。 显色反应的条件 1、被测物质与所生成的有色物质之间，必须有确定的定量关系。 2、反应产物必须有足够的稳定性。 3、显色剂在测定波长处无明显吸收。 4、反应产物的摩尔吸收系数足够大(103～105)，以保证灵敏度。 5、显色反应须有较好的选择性，才能减免干扰因素。 影响因素 *一般用校正曲线法测定 1.试剂与溶剂 2.酸碱度 3.时间 4.温度及其它 * * * * * * * * * * * * * * (二) 对比吸光度(吸光系数)的比值 举例：UV-Vis法鉴别VB12注射液 (三) 对比吸收光谱的一致性 将试样与已知标准品配制成相同浓度的溶液，在同一条件下分别描绘吸收光谱，核对其一致性。两个化合物若是相同的，其吸收光谱应完全一致。也可利用文献所载的标准图谱进行核对。 定性原则： 对比结果相同，可能是同一物质。 对比结果不同，肯定不是同一物质。 丙酸倍氯米松-倍他米松紫外光谱图 丙酸倍氯米松的 1条吸收光谱 倍他米松的 1条吸收光谱 比对比较 褶合 变换 褶合变换 135条褶合光谱 135条褶合光谱 丙酸倍氯米松-倍他米松褶合光谱差谱图 (差谱比率83.31%) 二、纯度检查 (一)杂质检查 例：乙醇和环己烷中苯的检查 空白醇(1)，醇中含苯0.0001%(2)与0.001%(3)的吸收光谱含苯0.0001%醇液的二阶(4)与四阶(5)导数光谱 (二)杂质限量检查 1.以某个波长的吸光度值表示 2.以峰、谷吸光度的比值表示 例 碘磷定?max 294nm处，杂质几乎没有吸收；但在?min 262nm处有一些吸收。 (已知碘磷定A294/A262=3.39) A294/A2623.39 ? 肾上腺素(…)与肾上腺酮(?)的吸收光谱 310nm UV Spectrophotometer How UV-Vis is applied in qualitative analysis? How UV-Vis is applied in quantitative analysis? 三、(单组分)样品的定量方法 组分的测定波长大于溶剂的截止波长 (一) 吸光系数法 (二) 标准曲线法 (三) 对照法 (一)吸光系数法 A= ECl——C=A/El (g/100ml) A=εCl——C=A/εl (mol/L) 例 维生素B12的水溶液在361nm处的 值是207，盛于1cm吸收池中，测得溶液的吸光度为0.414，则溶液浓度为： C = = = 0.002(