【2017年整理】Jackson ImmunoResearch 公司二抗选用指南.docVIP

Jackson ImmunoResearch 公司二抗选用指南(此部分内容来源于Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc网站，如有疑问，请参考原网站） 　 用亲和层析法纯化的抗体是指，利用耦联到琼脂糖凝胶上的抗原将抗血清中的抗体亲和层析下来。我们采用一种特有的连续的洗脱过程将抗体从固态抗原上分离出来。我们提供的未标记的亲和层析法纯化的抗体是不含有稳定剂和防腐剂的无菌液体。耦联标记物的抗体是冻干粉，里面含有稳定剂和防腐剂，但是过氧化物酶标记的抗体里面不含防腐剂。 ? (下面内容中的页码指的是Jackson 2006年原版目录中的页码） 第一步：选择Whole IgG（8－17页）、F(ab’)2片段（18－22页），或者Fab片段（23－25）抗体。 我们提供三种亲和纯化的抗体：Whole IgG，F(ab’)2片段，Fab片段。? ?Whole IgG（8－17页）抗体是从抗血清中分离出来的完整的分子。这些抗体有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分，因此是二价的。Whole IgG抗体适用于多数情况（见F(ab’)2片段、Fab片段的特例），也是性价比最高的。 F(ab’)2片段（18－22页）抗体是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分（依然是二价的）。这些抗体用在特定的情况中，例如避免抗体与Protain A 或G结合，或者与有Fc受体的活细胞结合。但是，如果一抗是whole IgG，不管二抗是哪种形式都可能出现结合Fc受体。这时，为了阻止抗体结合到Fc受体上，可以在4度将细胞预培养于含有叠氮钠和二抗来源物种正常血清的缓冲液中。 ?注意：当使用的是带标记的二抗时，千万不能用一抗来源物种的正常血清和IgG来封闭。如果血清中的免疫球蛋白非特异性的结合到样品上，他们会被带有标记的二抗识别，导致背景过高。 ?Fab片段（23－25页）抗体是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。这些抗体只含有一个结合位点。它们用来封闭内源性的免疫球蛋白，或者在使用相同物种来源的一抗作多标记的实验中，用于封闭暴露的免疫球蛋白。 ? 第二步：在左边标记“antibody description”的拦里找到一抗的物种来源。 ? 抗体是根据一抗的物种来源的字母表顺序排列。比如，如果一抗是小鼠来源的，就找“anti-mouse”。 ? 说明：目录中提供了抗叙利亚仓鼠和抗亚美尼亚仓鼠的抗体。为了正确的选择二抗，必须知道一抗是在哪种仓鼠中制备的。 ? 第三步：在“antibody description”下选择二抗的物种来源。 ?? 物种来源在antibody description栏的开头。 ? 第四步：再antibody description下面选择二抗的特异性。 ? 注意：不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构，抗体的生成过程也相似。抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应，除非事先特殊处理过－这时会标有“(min X …Sr Prot)。更多内容见3－4页的ML（multiple labeling）。 ? 下面词语的解释将对选择合适的抗体有所帮助。 Anti-IgG (H+L) 这类抗体和IgG分子的重链和轻链都可以反应，比如，和IgG分子的Fc，F(ab’)2/Fab部分。Anti-IgG (H+L)抗体也可以和其他的免疫球蛋白家族反应（比如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链（或者κ链，或者λ链）。Anti-IgG (H+L)抗体比只抗片段的抗体识别更多的抗原表位。 Anti-IgG，Fc fragment specific 这类抗体和IgG重链的Fc部分反应。它们通过了ELISA检测，和/或针对Fab片段吸附的测试。某些情况下，这类抗体需要额外检测和处理来降低和IgM或IgA的交叉反应。在这种情况下（anti-human,-mouse,-rat），它们会被描述为“Anti-IgG, Fcγfragment specific”。 注意：不是所有anti-IgG, Fc抗体和所有亚型的IgG反应能力一致。要找和四种IgG亚类反应能力差不多的anti-mouse IgG, Fcγ抗体的话，应当选Goat Anti-Mouse IgG(subclasses 1+2a+2b+3), Fcγfragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot), 在13页和17页。 Anti-IgG，Fcγ Subclass specific 这类抗体（13，27，30页）分别和不同的小鼠IgG亚型重链的Fc部分反应。它们经过ELISA和/或针对Fab片段、IgM和其他小鼠IgG亚型的吸附测试。 Anti-IgG，F(ab