纖维素酶提取盘龙参中的多酚.docVIP

纤维素酶法提取盘龙参中的总多酚 多酚类是植物次生代谢产物，具有独特的化学和生理活性，摄取一定量的多酚类物质能够有效地预防和控制疾病的发生，多酚类已被称作人类健康的“第7营养素”，成为人类预防和治疗疾病的天然保键品和药物。植物多酚是植物体内的复杂酚类次生代谢产物，具有多元酚结构，主要存在植物体的皮、根、叶、壳和果肉中。　 盘龙参来源于兰科植物绶草，以根或全草入药。入肺、 肝、 肾三经。滋阴补虚 、治腰脊痛、 遗精、 诸虚百损，具有滋阴益气、 凉血解毒、 润肺止咳的功效。盘龙参细胞壁主要成分是纤维素，恰当地利用纤维素酶处理，可使细胞壁发生不同程度的改变，如软化 膨胀和崩溃等，从而可改变细胞壁的通透性，提高有效成分的提取率，本方案研究酶添加量、酶解时间﹑酶解温度﹑pH 对盘龙参中多酚的影响。 材料与仪器 材料 盘龙参，配制各种含量的纤维素酶溶液，没食子酸，60%的乙醇，FC显色剂，20%碳酸钠溶液等。 1. 1. 2 FC显色剂的制备：称取10 g钨酸钠和2. 5 g钼酸用70 ml蒸馏水溶于250 ml回流瓶中,加入5 ml磷酸和10 ml浓盐酸,混匀,微沸回流2 h,加入15 g硫酸锂、5 ml蒸馏水和3滴溴水,开口沸腾15 min (至溴水挥尽为止),放冷,定容至100 ml滤过,置棕色瓶中保存备用。使用时加入1倍蒸馏水稀释,即得。 1. 1. 3 20%碳酸钠溶液的配制：称取100 g无水碳酸钠,溶于250 mL蒸馏水中,超声溶解,放冷,定容至500 mL,滤过,即得。 仪器 恒温水浴锅，酸碱度计，723型分光光度计，分析天平， 时间表，容量瓶等。 实验 2．1 工艺过程 选材 →调料液比 →调 pH 值 →水浴酶解 →水浴 →灭酶 →抽滤→滤液检测总多酚含量。 2．2 单因素实验 纤维素酶法提取的效果主要取决于酶的添加量﹑酶解时间﹑温度﹑P H ﹑物料细度﹑搅拌等多种因素, 其中选取添加量﹑酶解时间﹑温度和 P H 作为主要因素来考察。 2. 2. 1 酶添加量对总多酚得率的影响 盘龙参样品 (取干燥至恒重的盘龙参2.00g，磨成粉末，用10倍浓度为60%的乙醇浸泡,调 P H为5 ) 中分别添加 0.3 % ﹑0.4 % ﹑0.5 %﹑ 0. 6% ﹑0 .7 % 的酶，以不加酶为对照，5 0℃，酶处理1.5h, 85℃灭酶20min ，过滤，即得样品溶液， 分别称取10.0000g样品置于内盛有50 ml水的100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀（溶液甲）。吸取10 ml溶液甲，置于100ml容量瓶中，容量瓶中加蒸馏水3 ml，加FC显色剂1.5 ml,摇匀后8 min内加入20%碳酸钠溶液3 ml,用蒸馏水定容至刻度,室温下避光放置2h，在508nm波长下用1cm的比色皿进行吸光度测定。再检测总多酚含量。 纤维素酶的含量 0.0% 0.3 % 0.4 % 0.5 % 0. 6% 0 .7 % 吸光度A 以纤维素酶的含量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘图。 2. 2. 2 酶解时间对总多酚得率的影响 在 P H 5 ，酶解温度 50℃，酶添加量通过上述实验来确定, 酶解时间选取 0.5、 1. 0 、1. 5 、2.0、2.5 h其他步骤同上。 酶解时间∕h 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 吸光度A 2. 2. 3 酶处理温度对总多酚得率的影响 在P H 5，通过上述实脸确定的酶添加量和处理时间, 选取 4 0 、 45 、50、5 5 、6 0 ℃处理, 其他步骤同上。 温度∕℃ 40 45 50 55 60 吸光度A 2. 2. 4 pH 值对总多酚得率的影响 从上述实验确定的最佳条件下, 选取 pH 4 .6 、4. 8 、5. 0 、 5. 2 、 5. 4 处理, 其他步骤同上。 PH值 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 吸光度A 2. 2. 5 未加纤维素酶和加酶分别对总多酚的影响 加酶：从上述实验确定的最佳条件下，进行与上相同的步骤，再检测总多酚的含量。 未加酶：跟加酶相同的条件，进行与上相同的步骤，在检测总多酚的含量。 比较加酶与未加酶提取的总多酚的含量。 两种情况 加酶 未加酶 吸光度A 比较两种情况 2. 3 正交实验 根据单因素实验结果可得各因素的最佳水平，然后各取2个水平，设计 L9(34)正交实验表, 进行正交实验, 通过正交分析可以得到提取工艺的最优组合。 表1　正交实验因素水平表 因素水平 酶添加量A﹙﹪﹚ 酶解时间B（h） 酶处理温度C（℃） pH 值 1 2 3 表2　L9(34)正